研究課題
基盤研究(A)
中枢神経系をニューロンレベルからボトムアップに理解しようとするときに、決定的にかけている情報は「局所神経回路」の詳細である。これを解析する戦略として、細胞内染色法と遺伝子技術等を組み合せた「From one to many」の研究戦略により、以下の成果を得た。(1)蛍光顕微鏡下に生きたままGABA作動性ニューロンを観察できる遺伝子改変動物を用いて、ホールセルクランプにより細胞内染色する。この際、アダルト動物でのホールセルクランプが困難であるという問題を、GAD67/GFP knock-in mouseを用いた実験系でほぼ解決し、論文として報告した。現在この技術を用いて、VGAT/GFP BAC transgenic ratと逆行性標識法との組み合わせにより、皮質GABA作動性インターニューロンから皮質脊髄投射ニューロンへの入力を解析している。(2)lentivirusをトランスジェニック動物での遺伝子発現・タンパク質局在に関して良いモデルとして使えると考え、これを用いて8種類のtagged GFPを試みた。その結果、ニューロンの樹上突起をGolgi染色様に標識できるtagged GFP([myristoylation/palmitoylation site of Fyn]-[GFP]-[LDL receptor C-terminus]; myrGFP-LDLRCT)を開発できた。Thyl promoterとGAD67 promoter下にこのtagged GFPを発現するtransgenic mouseを作製してGFPのdendritic membrane targetingに成功したので論文として発表した。現在、より発現特異性の高いparvalbumin(PV)promoter等を用いたBAC transgenic mouseを作成中であり、PV/myrGFP-LDLRCT BAC transgenic mouseの作製に成功したところである。(3)大脳皮質の投射ニューロンをGolgi染色様に逆行性標識することをめざして、1)pesudorabies virus, 2)rabies virus glycoprotein(RVG)でpseudotypeにしたSindbis virus,あるいは3)RVG-pseudotypedlentivirus等の開発を行なっている。さらに、myrGFP-LDLRCT adenovirusを用いた逆行性標識の試み(高塩濃度下に注入)も行なって一定の成功を得ており、1個の錐体ニューロンから皮質視床投射ニューロンへの局所入力を解析している。また、tagged GFPの発現量を高めるためにTet-off systemの強力promoterを組み込んだadenovirusも開発している。(4)VGluT1およびVGluT2が皮質線条体入力と視床線条体入力に対応することを用いて、それぞれの線条体入力を電顕を用いて形態学的に解析した。この基礎データをもとに、Sindbis virusによるゴルジ染色様標識とVGluTの免疫染色を組み合わせて、1個の線条体ニューロンに対してどの程度の皮質入力(VGluT1)および視床入力(VGluT2)があるか、現在検討中である。
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Journal of Neuroscience Methods (in press)
Brain Research 1201
ページ: 78-87
Neuroscience Research 61
ページ: 79-91
Journal of Neuroscience (in press)
Journal of Neuroscience Methods 171
ページ: 118-125
Journal of Histochemistry & Cytochemistry (in press)
Brain Research vol.1201
Neuroscience Research vol.61, no. 1
Journal of Neuroscience Methods vol.171, no. 1
Journal of Histochemistry & Cytochemistry
Brain Research (in press)
Neuroscience Research (in press)
The Journal of Comparative Neurology 500
ページ: 908-922
European Journal of Neuroscience 25
ページ: 406-416
The Journal of Comparative Neurology 502
ページ: 113-125
120000807637
Gene Therapy 14
ページ: 872-882
Cerebral Cortex 17
ページ: 1984-1957
European Journal of Neuroscience 26
ページ: 3054-3067
ページ: 3093-3103
Journal of Neuroscience 28
ページ: 1789-1797
The Journal of Comparative Neurology vol.500, no. 5
European Journal of Neuroscience vol.25, no. 2
The Journal of Comparative Neurology vol.502, no. 1
Gene Therapy vol.14, no. 11
European Journal of Neuroscience vol.26, no. 8
Gene Therapy (in press)
European Journal of Neuroscience 25・2
Neuroscience Research 54
ページ: 149-153
10020613863
The Journal of Comparative Neurology 498
ページ: 129-141
The Journal of Comparative Neurology, 498
ページ: 539-551
European Journal of Neuroscience 24
ページ: 2813-2824
Neuroscience Research vol.54, no. 2
The Journal of Comparative Neurology vol.498, no. 1
The Journal of Comparative Neurology vol.498, no. 4
European Journal of Neuroscience vol.24, no. 10
ページ: 2813-1824
The Journal of Comparative Neurology 500・5
European Journal of Neuroscience 24・10
The Journal of Comparative Neurology 498・4
The Journal of Comparative Neurology 498・1
European Journal of Neuroscience 23(4)
ページ: 1063-1070
Neuroscience Research 54(2)
Neuroscience Research 51
ページ: 81-91
10015450532
The Journal of Comparative Neurology 492
ページ: 263-288
European Journal of Neuroscience 22
ページ: 3137-3146
Neuroscience Research vol.51, no. 1
The Journal of Comparative Neurology vol.492, no. 3
European Journal of Neuroscience vol.22, no. 12
European Journal of Neuroscience 22(12)
Proceedings of National Academy of Sciences USA 102(47)
ページ: 17172-17177
The Journal of Neuroscience 25(42)
ページ: 9782-9793
The Journal of Comparative Neurology 492(3)
European Journal of Neuroscience (in press)
The Journal of Neuroscience 24
ページ: 5370-5380
Neuroscience Research 40
ページ: 381-394
10023901688
ページ: 395-410
The Journal of Comparative Neurology 480
ページ: 143-161
European Journal of Neuroscience 20
ページ: 3322-3330
The Journal of Neuroscience vol.24, no. 23
Neuroscience Research vol.40, no. 4
The Journal of Comparative Neurology vol.480, no. 2
European Journal of Neuroscience vol.20, no. 12
European Journal of Neuroscience 20(no.12)
The Journal of Comparative Neurology 480(no.2)
Neuroscience Research 40(no.4)
Cerebral Cortex 14(no.11)
ページ: 1266-1275
http://www.mbs.med.kyoto-u.ac.jp/