遺伝子改変マウスを使用した大脳新皮質投射型GABA神経細胞の役割に関する研究

研究課題番号：19650085

2008年度 研究実績報告書

代表者

    • 玉巻 伸章
    • 研究者番号：20155253
    • 熊本大学・医学薬学研究部・教授

研究課題基本情報

  • 研究期間

    2008年度〜2008年度

  • 研究分野

    神経解剖学・神経病理学

  • 審査区分

  • 研究種目

    萌芽研究

  • 研究機関

    熊本大学

  • 配分額

    • 2007年度：2000千円 (直接経費：2000千円)
    • 2008年度：1300千円 (直接経費：1300千円)

研究概要

作成したNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動確認:本研究では、すでに作成したnNOS-Cre/tet-onマウスとHA,Chop2-Cre-reporter mouseの作動が正確であるかどうかを確認した。それぞれのDNAコンストラクトは、ドキシサイクリン投与まではCreの働きを最低限に抑えられるようにcultured-cellで十分にモニター実験を繰り返したものであった。両者を掛け合わせ生まれたマウスが4週齢以上に成育して、興奮性神経細胞でのnNOS promoter活性が終息した段階に、ドキシサイクリンを常時飲水の中に添加して、bidirectional promoter上のrtTSサプレッサーを除き、rtTA2Mの結合を促してFlpeを発現させ、一週間程度の期間を掛けてnNOS陽性細胞にCreを発現させた。CreはloxPではさまれたmodified red fluorescent protein (mRFP) cDNAを除くことにより、HR,Chop2, YFPがCAG promoterの下流に来て、3つの蛋白発現が始まる事が期待された。さらに2-3日の生存期間をおいて灌流固定し、nNOSとGFPに対する二重免疫組織化学を行い、明らかなGFP陽性でnNOS陰性の細胞が無いことを期待していた。GFP陰性nNOS陽性の細胞は、tet-onからCreによるDNAの組み換えにいたらなかった場合であり、全てが二重染色になるようにドキシサイクリンの投与量と期間を調整した(全てのnNOS陽性細胞のレポーター標識)。しかし、現在までのところtet-on systemが予定通りの頻度で働いておらず、望む実験ができていない。

発表文献

雑誌論文

  • Tanahira C: "Parvalbumin neurons in the forebrain as revealed by parvalbumin-Cre transgenic mice." Neurosci Res 63(3). 213-23 (2009), 1

  • I de Y: "Rapid integration of young newborn dentate gyrus granule cellsin the adult hippocampal circuitry." Eur J Neurosci. 28(12). 2381-92 (2008), 1,

  • Kaneko K: "Noradrenergic excitation of a subpopulation of GABAergic cellsin the basolateral amygdala via both activation of nonselective cationic conductance and suppression of resting K+conductance : a study using glutamate decarboxylase 67-green fluorescent protein knock-in mice." Neuroscience 157(4). 781-97 (2008), 1

  • Yamamoto E: "Excess salt causes cerebral neuronal apoptosis and inflammation in stroke-prone hypertensive rats through angiotensin II-induced NADPH oxidase activation." Stroke 39(11). 3049-56 (2008), 1

  • Huang J: "5-HT(3A)receptor subunit is expressed in a subpopulation of GABAergic and enkephalinergic neurons in the mouse dorsal spinal cord." Neurosci Lett 441(1). 1-6 (2008), 1

  • Basu K: "Novel strategy to selectively label excitatory and inhibitoryneurons in the cerebral cortex of mice." J Neurosci Methods 170(2). 212-9 (2008), 1,

  • Esumi S: "Method for single-cell microarray analysis and application to gene-expression profiling of GABAergic neuron progenitors" Neurosci Res 60(4). 439-51 (2008), 1,

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