細胞の微細形態形成に関わる新規遺伝子を同定する手法の開発

研究課題番号：19659043

2008年度 研究実績報告書

代表者

    • 原田 彰宏
    • 研究者番号：40251441
    • 群馬大学・生体調節研究所・教授

研究課題基本情報

  • 研究期間

    2008年度〜2008年度

  • 研究分野

    解剖学一般(含組織学・発生学)

  • 審査区分

  • 研究種目

    萌芽研究

  • 研究機関

    群馬大学

  • 配分額

    • 2007年度：1300千円 (直接経費：1300千円)
    • 2008年度：1900千円 (直接経費：1900千円)

研究概要

申請者は、神経細胞のモデルとして頻用されるPC12細胞を用いて、シナプス小胞の輸送や分布に関連する遺伝子を同定することを目的に、レトロウイルスを感染させて形態学的スクリーニングを行う新しいgene trap(遺伝子トラップ)法を開発し、現在いくつかの興味深い新規遺伝軸子の同定を始めている。そこで申請者はレトロウイルスベクターを用いたgene trap法のシステムを開発し、PC12細胞においてその応用に成功した。このシステムは、レトロウイルスベクターを、目的とする培養細胞のゲノムDNAに挿入することで遺伝子の機能を不活性化させるものである。ベクターは、ベクターの挿入された細胞を高率に濃縮できるように工夫されているため、それらの細胞を形態学的な特徴によってスクリーニングすることが初めて可能になった。そして、そのベクターの性質を利用してベクターが挿入された遺伝子を簡便に同定し、更にCre-loxP技術を用いて、その遺伝子が異常な表現型の原因か否か簡便に確認できるという優れた利点を持つ。

申請者はこの技術を用いて、PC12細胞でシナプス小胞(正確にはシナプス小胞様小胞)の量や分布に異常を引き起こす遺伝子をいくうか同定した。更にそのうちのある遺伝子は脳に多く発現し、ヒトの神経疾患との関連がしられているため、その遺伝子の欠損マウスを作製し、その表現型を現在解析している。また他の細胞でもこのスクリーニングが行えるか、現在検討中である。

発表文献

雑誌論文

  • Kazuhiro Muramatsu: "Neuron-specific recombination by Cre recombinase inserted into the murine tau locus" Biochemical and biophysical research communications 370. 419-423 (2008), 1

  • Yukiko Hashimoto: "Neuron-specific and inducible recombination by Cre recombinase in the mouse" Neuroreport 19. 621-624 (2008), 1,

  • Miyuki Sato: "Rabil is required for synchronous secretion of chondroitin proteoglycans after fertilization in Caenorhabditis elegans." Journal of cell science 121. 3177-3186 (2008), 1,

  • Yukio Kato: "Investigation of the role of oligopeptide transporter PEPT1 and sodium/glucose cotransporter SGLT1 in intestinal absorption of their substrates using small GTP-binding protein Rab8-null mice." Drug metabolism and disposition 37. 602-607 (2009), 1

  • Hisanobu Sadakata: "SAP-1 is a microvillus-specific protein tyrosine phosphatase that modulates intestinal tumorigenesis." Genes to cells 14. 295-308 (2009), 1

  • Chihiro Mogi: "Involvement of proton-sensing TDAG8 in extracellular acidification-induced inhibition of proinflammatory cytokine production in peritoneal macrophages." The journal of immunology 182. 3243-3251 (2009), 1

  • Takefumi Uemura: "p31 deficiency influences endoplasmic reticulum tubular morphology and cell survival." Molecular and cellular biology 29. 1869-1881 (2009), 1,

学会発表

  • 村松一洋: "tau-Creノックインマウスどtau-Cre PRマウスは神経細胞特異的及び時期特異的にCre recombinaseによる組換えを生じる" 第31回日本神経科学大会. (20080711). 東京

  • 村松一洋: "ジーントラップ法による神経細胞極性あるいは小胞輸送関連遺伝子のスクリーニング" 第31回日本分子生物学会年会. (20081212). 神戸

その他・備考

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