研究概要 |
ECFP-VAMP、EGFP-fodrin、またこれら2者を同時にトランスフェクションしたのちに、分泌刺激(GH3にはTRH, high K, AtT-20にはhigh K, CRH)を加え、GHの分泌過程、分泌顆粒が発芽し分泌をおこす際に、ECFP-VAMP、EGFP-fodrinがどの過程まで作用しているか、real-timeに観察した。共焦点レーザー顕微鏡のほかに、二光子顕微鏡を用いて細胞膜直下についても観察した。ついで、siRNAを用いてVAMP. fodrinの作用を阻害し、porosomeの形成とGHの分泌が抑制されることを観察した。VAMP. fodrinについていくつかの塩基配列をターゲットとしてsiRNAを作成し、ベクターに組み込んで、EYFP-GHを発現するGH3 cellとAtT-20 cellにtransfectionした。そして、VAMP.fodrinの発現が抑制されていることを、タンパクレベルとmRNAレベルで確認した。これまでに行ってきた分泌刺激(GH3にはTRH, high K, AtT-20にはhigh K, CRH)に対して、EYFP-GHの分泌が抑制されることを共焦点レーザー顕微鏡で観察した。このことにより、GHの分泌におけるVAMP, fodrinの役割をよりいっそう明確になった。これら、VAMP. fodrinの抑制が、GHの分泌抑制をおこすこと、ひいてはGH産生下垂体腺腫の新たな治療方法となりうると考えられた。
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