| 研究課題/領域番号 |
09670440
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
山本 雄二 岡山大学, 医学部, 講師 (30136379)
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| 研究分担者 |
石津 日出雄 岡山大学, 医学部, 教授 (70033157)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| 研究課題ステータス |
完了 (1998年度)
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| 配分額 *注記 |
2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
1998年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1997年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 遺伝的多型 / マイクロサテライト / 指紋 / マルチプレックスPCR法 / nested-PCR法 / dual-PCR法 / STR多型 |
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| 研究概要 |
今回我々はPCRによるSTR多型検出法の感度をさらに高め、超微量の試料DNAからの多型検出を可能とし、従来はほとんど省みられなかった指紋からのDNA多型の検出を試みた。
指紋からのSTR多型検査に先だって、STR多型の高感度検出法について検討した。通常のPCR法とDual-PCR法によるSTR多型の検出感度を比較した結果、Dual-PCR法により検出を行った場合には、通常のPCR法に比べて10倍ないし数十倍程度感度が向上した。なお、これらの方法をPEP法と併用した場合には、PEP法と通常のPCR法との併用では10倍程度感度が向上し、PEP法とDual-PCR法を併用した場合の感度は、Dual-PCR法のみの場合とほぼ同様であった。
次に、ガラス、金属(ステンレス)、紙(上質紙)、プラスチック(ポリスチレン)に実験的に付着させた指紋から、高感度化したPCR法によりSTR多型の検出を試みたところ、Dual-PCR法およびPEP法とDual-PCR法との併用法により1個の指紋からアレルの検出が可能であった。
今回試みた指紋からのDNA抽出・精製法の中では、抽出DNAをセントリコン50またはシリカフィルターにより精製した場合に良好な成績が得られた。
今回検査したSTR多型3座位の中では、増幅DNA断片長が最も長いCSF1PO座位(299-323bp)の増幅がやや不良であったが、これは指紋から回収されるDNAが低分子化しているためと推測された。なお、指紋の顕出に用いられるアルミニウム粉末、ニンヒドリン試薬は指紋からのSTR多型検出の妨げとはならなかった。
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