リン酸基アフィニティー蛍光ディファレンスゲル二次元電気泳動法の開発

• 研究課題/領域番号: 20790036
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 木下 恵美子 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (40379912)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2009
• 研究課題ステータス: 完了 (2009年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2009年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2008年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: ナノ材料 / 分子認識 / 蛋白質 / バイオテクノロジー / 分析化学 / リン酸化 / フォスタグ / 電気泳動

研究概要

フォスタグを用いた技術の1つにリン酸アフィニティー電気泳動法がある。通常の電気泳動ではリン酸基の有無による移動度の差がほとんどない。しかし,フォスタグを加えることで,リン酸基1つの違いでも分離することができる。更に,フォスタグは生体試料や低濃度の蛋白質にも適用できる。本研究では,この方法を用いたリン酸化蛋白質解析のための新しい2次元電気泳動法を開発した。

研究成果

• [雑誌論文] Genotyping and mapping assay of single-nucleotide polymorphisms in CYP3A5 using DNA-binding zinc(II) complexes (2010)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Nakashima, H., Koike, T
  • 雑誌名: Clin. Biochem 43 ページ: 302-306
  • 査読あり
• [雑誌論文] Genotyping and mapping assay of single-nucleotide polymorphisms in CYP3A5 using DNA-binding zinc(II) complexes (2010)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 雑誌名: Clin.Biochem 43 ページ: 302-306
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE (2009)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • 雑誌名: Nat. Protoc 4 ページ: 1513-1521
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose (2009)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Ujihara, H., Koike, T
  • 雑誌名: Proteomics 9 ページ: 4098-4101
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phosphate-affinity gel electrophoresis using a Phos-tag molecule for phosphoproteome study (2009)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • 雑誌名: Curr. Proteomics 6 ページ: 104-121
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates (2009)
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 389 ページ: 83-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptides (2009)
  • 著者名/発表者名: T akiyama, K., Kinoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Fujioka, Y., Kubo, Y., Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 388 ページ: 235-241
  • NAID: 120002023643
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two-dimensional phosphate-affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Matsubara, M., Aoki, Y., Ohie, S., Mouri, Y., Koike, T
  • 雑誌名: Electrophoresis 30 ページ: 550-559
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 389 ページ: 83-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 雑誌名: Proteomics 9 ページ: 4098-4101
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 雑誌名: Nat.Protoc. 4 ページ: 1513-1521
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two-dimensional phosphate-affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, Eiji
  • 雑誌名: Electrophoresis 30 ページ: 550-559
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptides (2009)
  • 著者名/発表者名: Takiyama, Kei
  • 雑誌名: Anal. Biochem. (In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • 著者名/発表者名: I shiai, M., Kitao, H., Smogorzewska, A., Tomida, J., Kinomura, A., Uchida, E., Saberi, A., Kinoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T., Tashiro, S., Elledge, S.J., Takata, M
  • 雑誌名: Nat. Struct. Mol. Biol 15 ページ: 1138-1146
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of the Gua/Cyt-to-Cyt/Gua mutation in a Gua/Cyt-lined sequence using Zn^<2+>-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Yoshimoto, M., Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 380 ページ: 122-127
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Matsubara, M., Yamada, S., Nakamura, H., Shiro, Y., Aoki, Y., Okita, K., Koike, T
  • 雑誌名: Proteomics 8 ページ: 2994-3003
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 378 ページ: 102-104
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gelelectrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, Emiko
  • 雑誌名: Anal. Biochem. 378 ページ: 102-104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, Eiji
  • 雑誌名: Proteomics 8 ページ: 2994-3003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of the Gua/Cyt-to-Cyt/Gua mutation in a Gua/Cyt-lined sequence using Zn^<2 +>-cyclen polyacrylamide gelelectrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, Eiji
  • 雑誌名: Anal. Biochem. 380 ページ: 122-127
  • 査読あり
• [雑誌論文] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to torn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • 著者名/発表者名: Ishiai, Masamichi
  • 雑誌名: Nat. Struct. Mol. Biol. 15 ページ: 1138-1146
  • 査読あり
• [学会発表] 細胞内リン酸化シグナル解析におけるPhos-tag固定化ポリマーの新しい応用法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 山田篤志, 氏原弘洋, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山県桃太郎アリーナ
  • 年月日: 2010-03-29
• [学会発表] DNA結合性亜鉛錯体を用いたCYP3A5遺伝子における一塩基多型の高精度検出法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中島弘美, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山県桃太郎アリーナ
  • 年月日: 2010-03-29
• [学会発表] 新規リン酸親和性カラムを用いたヌクレオチド類の精製法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 宗村雅男, 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山県桃太郎アリーナ
  • 年月日: 2010-03-29
• [学会発表] 細胞内リン酸化シグナル解析におけるPhos-tag固定化ポリマーの新しい応用法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(岡山市)
  • 年月日: 2010-03-29
• [学会発表] 改良型リン酸基親和性電気泳動法による200 kDa以上の高分子量タンパク質のリン酸化異性体解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 山田篤志, 氏原弘洋, 小池透
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2009-10-24
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を用いたヒスチジン・アスパラギンリン酸化タンパク質の定量解析法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 柳原志穂, 木下恵美子, 木下英司, 中神明, 小池透
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2009-10-24
• [学会発表] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 山田篤志, 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2009-10-24
• [学会発表] 改良型リン酸基親和性電気泳動法による200kDa以上の高分子量タンパク質のリン酸化異性体解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(神戸市)
  • 年月日: 2009-10-24
• [学会発表] 蛋白質リン酸化解析のためのリン酸基親和性2次元電気泳動法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第60回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 松本市Mウィング文化センター
  • 年月日: 2009-09-19
• [学会発表] Phos-tag固定化ポリマーを利用したシグナル伝達解析における選択的な蛋白質リン酸化検出のための新技術 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第7回大会
  • 発表場所: 北里大学薬学部
  • 年月日: 2009-07-28
• [学会発表] フォスタグ電気泳動法を用いた細菌2成分情報伝達系におけるリン酸化ヒスチジンおよびリン酸化アスパラギン酸蛋白質異性体の同時定量解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中村寛夫, 城宜嗣, 小池透
  • 学会等名: 第9回蛋白質科学会
  • 発表場所: 熊本全日空ホテルニュースカイ
  • 年月日: 2009-05-20
• [学会発表] リン酸基アフィニティービーズ"Phos-tag Toyopearl"を用いたリン酸化プロテオーム解析における前処理技術の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 山田篤志, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第9回蛋白質科学会
  • 発表場所: 熊本全日空ホテルニュースカイ
  • 年月日: 2009-05-20
• [学会発表] Phos-tagを利用したメチル化DNA検出法の開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第50回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 鳥取市とりぎん文化会館
  • 年月日: 2009-05-16
• [学会発表] リン酸基結合ナノ分子を利用した高感度・高効率なエピジェネティクス変異検出技法の創成 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中島弘美, 氏原弘洋, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] 改変亜鉛サイクレン電気泳動法を用いたAT含有率が高い短PCR断片のSNP解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 原田奈生子, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] ペプチドのリン酸化状態を検出する蛍光共鳴エネルギー移動システムの開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 石村憲和, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を利用した同じリン酸化量を有するリン酸化蛋白質異性体の分離検出 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 松原守, 山田斉爾, 中村寛夫, 城宜嗣, 青木悠里, 沖田鋼季, 小池透
  • 学会等名: BMB2008
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] リン酸基アフィニティービーズ"Phos-tagTM Toyopearl"を用いたリン酸化ペプチド&タンパク質の分離濃縮 (2008)
  • 著者名/発表者名: 山田篤志, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: BMB2008
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] ペプチドのリン酸化状態を検出する蛍光共鳴エネルギー移動システムの開発 (2008)
  • 著者名/発表者名: 多幾山敬, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: BMB2008
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] Separation of phosphoprotein isotypes with the same phosphate stoichiometry using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: BMB2008
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を利用した新しい遺伝子診断技術 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第59回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 麻布大学百周年記念ホール
  • 年月日: 2008-11-16
• [学会発表] フォスタグ結合型新規リン酸基アフィニティービーズを利用した細胞抽出液からのリン酸化蛋白質の分離と濃縮 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 井上知香, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第6回大会
  • 発表場所: ホテル阪急エキスポパーク
  • 年月日: 2008-07-29
• [学会発表] ペプチドのリン酸化/脱リン酸化反応を検出するfret型蛍光センサーの開発 (2008)
  • 著者名/発表者名: 多幾山敬, 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第49回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 香川県県民ホール
  • 年月日: 2008-05-16
• [図書] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 出版者: 秀潤社
• [図書] Methods in Molecular Biology, 578 (ed. by Komar AA) (2009)
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta, Kinoshita, E., Koike, T
  • 出版者: Humana Press
• [図書] Methods in Molecular Biology, 578 (ed. by Komar AA) (2009)
  • 著者名/発表者名: K inoshita, E., Emiko Kinoshita-Kikuta, Koike, T
  • 出版者: Humana Press
• [図書] Phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis for SNP genotyping. in Single Nucleotide Polymorphisms (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 総ページ数: 10
  • 出版者: Humana Press
• [図書] Zn(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for SNP detection. in Single Nucleotide Polymorphisms, Methods in Molecular Biology, 578 (ed.by Komar AA) (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E.
  • 総ページ数: 14
  • 出版者: Humana Press
• [図書] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法.細胞工学 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: 秀潤社
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html