リン酸親和性電気泳動に基づく蛋白質二重翻訳後修飾の同時検出法の開発とその応用

• 研究課題/領域番号: 22790037
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 木下 恵美子 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (40379912)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円); 2011年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2010年度: 2,470千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 570千円)
• キーワード: リン酸親和性2次元電気泳動法 / Phos-tag SDS-PAGE / 翻訳後修飾 / リン酸化 / ユビキチン化 / βカテニン / 卵白アルブミン / 蛍光ディファレンシャル電気泳動法 / β-カテニン / ナノ材料 / 分子認識 / 蛋白質 / バイオテクノロジー / 分析化学 / フォスタグ / 電気泳動

研究概要

本研究では,申請者らが開発したリン酸親和性電気泳動法(Phos-tag SDS-PAGE)を用いた2次元電気泳動法を基盤とした蛋白質翻訳後修飾の同時検出法の開発を行った.すなわち,蛋白質を1次元目としてSDS-PAGEなどの電気泳動法で分離し,次に2次元目としてPhos-tag SDS-PAGEで分離することによって,「リン酸化とユビキチン化」など,複数の翻訳後修飾に関する解析を1枚のゲルで同時に検出する方法である.

研究成果

• [雑誌論文] Separation andidentification of four distinctserine-phosphorylation states of ovalbuminby Phos-tag affinity electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta E., Kinoshita E., andKoike T
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: in press
• [雑誌論文] Highly sensitive detectionof protein phosphorylation by usingimproved Phos-tag Biotin (2012)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita E., Kinoshita-Kikuta E., Sugiyama Y., Fukuda Y., Ozeki T., andKoike T
  • 雑誌名: in press
• [雑誌論文] Phos-tag SDS-PAGEsystems for phosphorylation profiling ofproteins with a wide range of molecularmasses under neutral pH conditions (2012)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita E., Kinoshita-Kikuta E., andKoike T
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 12 ページ: 192-202
• [雑誌論文] 小池透フォスタグケミストリー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: 3-7
• [雑誌論文] 小池透今後の展望1中性条件で泳動を行う改良型Phos-tag SDS-PAGEを用いたリン酸化タンパク質解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: 41-44
• [雑誌論文] 小池透今後の展望2蛍光性Phos-tagを用いたタンパク質リン酸化反応の解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 多幾山敬, 宗村雅男
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: 45-49
• [雑誌論文] 小池透プロトコール集フォスタグテクノロジーを用いたリン酸化タンパク質解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: 51-75
• [雑誌論文] Phos-tag SDS-PAGE systems for phosphorylation profiling of proteins with a wide range of molecular masses under neutral pH conditions (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 12 号: 2 ページ: 192-202
  • DOI: 10.1002/pmic.201100524
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and identification of four distinct serine-phosphorylation states of ovalbumin by Phos-tag affinity electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: E.Kinoshita-Kikuta, E.Kinoshita, T.Koike
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: (掲載決定)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Highly sensitive detection of protein phosphorylation by using improved Phos-tag Biotin (2012)
  • 著者名/発表者名: E.Kinoshita, E.Kinoshita-Kikuta, Y.Sugiyama, Y.Fukuda, T.Ozeki, T.Koike
  • 雑誌名: Proteomics 巻: (掲載決定)
  • 査読あり
• [雑誌論文] フォスタグケミストリー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56
  • NAID: 130004809452
  • 査読あり
• [雑誌論文] 今後の展望1中性条件で泳動を行う改良型Phos-tag SDS-PAGEを用いたリン酸化タンパク質解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56
  • NAID: 130004809455
  • 査読あり
• [雑誌論文] 今後の展望2蛍光性Phos-tagを用いたタンパク質リン酸化反応の解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 多幾山敬, 宗村雅男, 小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56
  • NAID: 130004809456
  • 査読あり
• [雑誌論文] プロトコール集フォスタグテクノロジーを用いたリン酸化タンパク質解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56
  • NAID: 130004809457
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved Phos-tag SDS-PAG Eunder neutral pH conditions for advancedprotein phosphorylation profiling (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E. and Kinoshita-Kikuta E
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 11 ページ: 319-323
• [雑誌論文] A phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for theanalysis of the kinase reaction of asubstrate peptide (2011)
  • 著者名/発表者名: Somura, M., Takiyama, K., Kinoshita-Kikuta E., Kinoshita, E., Koike, T
  • 雑誌名: Analytical Methods 巻: 3 ページ: 1303-1309
• [雑誌論文] Zinc(II). cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for detection of mutations in short Ade/ Thy-rich DNA fragments (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita E., Kinoshita-Kikuta E., HaradaN., and Koike T
  • 雑誌名: AnalyticalBiochemistry 巻: 408 ページ: 348-350
• [雑誌論文] A novelphosphate-affinity bead with immobilized Phos-tag for separation and enrichment of phosphopeptides and phosphoproteins (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Yamada, A., Inoue, C., Kinoshita, E., Koike, T
  • 雑誌名: Journal of Integrated Omics 巻: 1 ページ: 157-269
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the kinase reaction of a substrate peptide (2011)
  • 著者名/発表者名: M. Somura, K. Takiyama, E. Kinoshita- Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Methods 巻: 3 号: 6 ページ: 1303-1309
  • DOI: 10.1039/c1ay05016h
  • 査読あり
• [雑誌論文] Zinc(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for detection of mutations in short Ade/Thy-rich DNA fragments (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, Harada, N., and Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 408 号: 2 ページ: 348-350
  • DOI: 10.1016/j.ab.2010.09.003
  • NAID: 120002753732
  • URL: http://ir.lib.hiroshima-u.ac.jp/00030873
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel phosphate-affinity bead with immobilized Phos-tag for separation and enrichment of phosphopeptides and phosphoproteins (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Yamada, A., Inoue, C., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: J. Integrated OMICS 巻: 1 号: 1 ページ: 157-169
  • DOI: 10.5584/jiomics.v1i1.46
  • 査読あり
• [雑誌論文] Zinc(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for detection of mutations in short Ade/Thy-rich DNA fragments. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 巻: 408 ページ: 348-350
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved Phos-tag SDS-PAGE under neutral pH conditions for advancedprotein phosphorylation profiling. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 11 ページ: 319-323
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel phosphate-affinity bead with immobilized Phos-tag for separationand enrichment of phosphopeptides and phosphoproteins. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E.
  • 雑誌名: J.Integr.Omics 巻: 1 ページ: 157-169
  • 査読あり
• [雑誌論文] Monitoring method for thealteration of phosphorylation status in ahigh-molecular-mass protein using Phos-tag electrophoresis technology (2010)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta E., Kinoshita E. andKoike T
  • 雑誌名: Seikagaku 巻: 82 ページ: 857-862
• [学会発表] Emiko Kinoshita-Kikuta, and Tohru Koike, Phos-tag SDS-PAGEsystems for phosphorylation profiling ofsignaling proteins with a wide range ofmolecular masses under neutral pHconditions (2011)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2011-12-16
• [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE systems for phosphorylation profiling of signaling proteins with a wide range of molecular masses under neutral pH conditions (2011)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta, Tohru Koike
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜市
  • 年月日: 2011-12-16
• [学会発表] Phos-tagBiotinの開発とその応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第62回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 横浜市開講記念会館改良型
  • 年月日: 2011-11-13
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotinの開発とその応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第62回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 横浜市
  • 年月日: 2011-11-13
• [学会発表] 亜鉛-Phos-tag SDS-PAGEによる細胞内キナーゼ/フォスファターゼの動態解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 第84回日本生化学大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 2011-09-24
• [学会発表] 亜鉛Phos-tag SDS-PAGEによる細胞内キナーゼ/フォスファターゼの動態解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 第84回日本生化学会
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2011-09-24
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotinを用いたペプチドマイクロアレイ解析による蛋白質リン酸化反応プロファイリング (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ,新潟
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] hos-tag技術の開発とリン酸化プロテオミクスへの応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木木下恵美子
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ,新潟
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] 中性ゲルを用いた改良型Phos-tag SDS-PAGEによるタンパク質リン酸化フォームの詳細な分離解析法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会
  • 発表場所: 新潟市
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotinを用いたペプチドマイクロアレイ解析による蛋白質リン酸化反応プロファイリング (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会
  • 発表場所: 新潟市
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] Phos-tag技術の開発とリン酸化プロテオミクスへの応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会
  • 発表場所: 新潟市(招待講演)
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] 中性ゲルを用いた改良型Phos-tag SDS-PAGEによるタンパク質リン酸化フォームの詳細な分離解析法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子, 木下英司, 小池透
  • 学会等名: 第9回日本プロテオーム学会大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ,新潟
  • 年月日: 2011-07-28
• [学会発表] Phos-tag-based fluorescence resonanceenergy transfer system for the analysis of phosphorylated molecules (2010)
  • 著者名/発表者名: Masao Somura, Kei Takiyama, TomomiNagai, Eiji Kinoshita, EmikoKinoshita-Kikuta, and Tohru Koike
  • 学会等名: 2010International Chemical Congress of PacificBasin Societies
  • 発表場所: Kamehameha Halls, Honolulu, Hawaii, USA.
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] Quantitative analysis of the phosphorylation states in a bacterialtwo-component system using Phos-tag SDS-PAGE (2010)
  • 著者名/発表者名: Shiho Yanagihara, Emiko Kinoshita-Kikuta, Eiji Kinoshita, and Tohru Koike
  • 学会等名: 2010International ChemicalCongress of Pacific Basin Societies
  • 発表場所: Kamehameha Halls, Honolulu, Hawaii
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] Phos-tagSDS-PAGE for protein phosphorylationprofiling (2010)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta, Saori Okatani, and Tohru Koike
  • 学会等名: 2010International ChemicalCongress of Pacific Basin Societies
  • 発表場所: Kamehameha Halls, Honolulu, Hawaii, USA
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE for protein phosphorylation profiling (2010)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita, E.
  • 学会等名: 2010 International Chemical Congress of Pacific Basin Societies
  • 発表場所: Convention Center, Honolulu, Hawaii, USA
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] Quantitative analysis of the phosphorylation states in a bacterial two-component system using Phos-tag SDS-PAGE (2010)
  • 著者名/発表者名: Yanagihara, S.
  • 学会等名: 2010 International Chemical Congress of Pacific Basin Societies
  • 発表場所: Convention Center, Honolulu, Hawaii, USA
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] A Phos-tag-basedfluorescence resonance energy transfersystem for the analysis of the kinasereaction of a substrate peptide (2010)
  • 著者名/発表者名: Masao Somura, Kei Takiyama, EmikoKinoshita-Kikuta, Eiji Kinoshita, andTohru Koike
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2010-12-09
• [学会発表] Improved Phos-tag Biotin for advanced profiling of proteinphosphorylation (2010)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta, and Tohru Koike
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2010-12-09
• [学会発表] Improved Phos-tag SDS-PAGE under neutral pH conditionsfor advanced protein phosphorylationprofiling (2010)
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta, Eiji Kinoshita, and Tohru Koike
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2010-12-09
• [学会発表] Improved Phos-tag SDS-PAGE under neutral pH conditions for advanced protein phosphorylation profiling (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会・第83回日本生化学学会年会
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2010-12-09
• [学会発表] 高分子量リン酸化蛋白質解析のための改良型Phos-tag電気泳動法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第61回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 北海道大学
  • 年月日: 2010-09-19
• [学会発表] 蛋白質リン酸化反応を高感度検出するための改良型Phos-tag Biotin (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第8回日本プロテオーム学会大会
  • 発表場所: 東京ベイホテル東急
  • 年月日: 2010-07-27
• [学会発表] Improved Phos-tag Biotin for highly sensitive detection of protein phosphorylation (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会第8回大会
  • 発表場所: 東京ベイホテル東急
  • 年月日: 2010-07-27
• [学会発表] 新規リン酸親和性Phos-tagビーズを用いたヌクレオチド類の分離精製法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 宗村雅男, 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 小池透
  • 学会等名: 第51回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 山口大学
  • 年月日: 2010-05-14
• [学会発表] 新規リン酸親和性Phos-tagビーズを用いたリン酸化タンパク質の分離濃縮法 (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 小池透
  • 学会等名: 第51回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 山口大学
  • 年月日: 2010-05-14
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考]
  • URL: http://www.phos-tag.com/
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/research.html