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ノックアウト効率の改善による初代完全ノックアウト動物の作成技術開発

研究課題

研究課題/領域番号 25430089
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
研究分野 実験動物学
研究機関広島大学

研究代表者

中島 圭介  広島大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (60260311)

研究分担者 矢尾板 芳郎  広島大学, 理学研究科, 教授 (00166472)
研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
研究課題ステータス 完了 (2015年度)
配分額 *注記
5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円)
2015年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2014年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2013年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
キーワードHost-transfer / TALEN / Genome editing / Targeted gene knockout / Xenopus / knockout / oocyte / host-transfer / DEADSouth / genome editing / knock out / host transfer / ゲノム編集 / ゼノパス / ノックアウト
研究成果の概要

F0世代で完全なノックアウトホモ個体を得るために本研究では卵母細胞にTALENを注入し、これを数日後に雌の腹腔に戻してから排卵・受精させる方法を用い、遺伝子発現の始まる前の発生段階であるstage 8において100%の変異導入効率を記録した。 また、TALENとmCherryの融合タンパク質をコードするmRNAを卵母細胞に注入し、 mCherryのタンパク質の発現量をWestern blottingで調べたところ、卵母細胞では受精卵と比較してタンパク合成が殆ど行われていない事が判明した。

報告書

(4件)
  • 2015 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2014 実施状況報告書
  • 2013 実施状況報告書
  • 研究成果

    (16件)

すべて 2016 2015 2014

すべて 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 2件、 査読あり 5件、 謝辞記載あり 4件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (11件) (うち招待講演 1件)

  • [雑誌論文] Generation of albino Cynops pyrrhogaster by genomic editing of the tyrosinase gene2016

    • 著者名/発表者名
      K. Nakajima, T. Nakajima and Y. Yaoita
    • 雑誌名

      Zoological Science

      巻: in press

    • NAID

      210000164354

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Ouro proteins are not essential to tail regression during Xenopus tropicalis metamorphosis2016

    • 著者名/発表者名
      Y. Nakai, K. Nakajima, Jacques Robert and Y. Yaoita
    • 雑誌名

      Genes to Cells

      巻: 21(3) 号: 3 ページ: 275-286

    • DOI

      10.1111/gtc.12337

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Xenopus pax6 mutants affect eye development and other organ systems, and have phenotypic similarities to human aniridia patients2015

    • 著者名/発表者名
      Takuya Nakayama, Marilyn Fisher, Keisuke Nakajima, Akinleye O. Odeleye, Keith B. Zimmerman, Margaret B. Fish, Yoshio Yaoita, Jena L. Chojnowski, James D. Lauderdale, Peter A. Netland, Robert M. Grainger
    • 雑誌名

      Developmental Biology

      巻: 408 号: 2 ページ: 328-344

    • DOI

      10.1016/j.ydbio.2015.02.012

    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Highly efficient gene knockout by injection of TALEN mRNAs into oocytes and host transfer in Xenopus laevisHighly efficient gene knockout by injection of TALEN mRNAs into oocytes and host transfer in Xenopus laevis2015

    • 著者名/発表者名
      K. Nakajima and Y. Yaoita
    • 雑誌名

      Biology Open

      巻: 4(2) 号: 2 ページ: 180-185

    • DOI

      10.1242/bio.201410009

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Development of a new approach for targeted gene editing in primordial germ cells using TALENs in Xenopus2015

    • 著者名/発表者名
      K. Nakajima and Y. Yaoita
    • 雑誌名

      Biology Open

      巻: 4(3) 号: 3 ページ: 259-266

    • DOI

      10.1242/bio.201410926

    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [学会発表] TALEN mRNAを注入した卵母細胞にホストトランスファー法を適用した高効率遺伝子破壊法2015

    • 著者名/発表者名
      中島圭介、矢尾板芳郎
    • 学会等名
      第38回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-12-01
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] ツメガエルの変態における尾の退縮にOuro蛋白質は関係していない2015

    • 著者名/発表者名
      中井裕也、中島圭介、矢尾板芳郎
    • 学会等名
      第38回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸市
    • 年月日
      2015-12-01
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] TALEN mRNAの卵母細胞への注射とhost transferによる高効率遺伝子破壊法2015

    • 著者名/発表者名
      中島圭介、矢尾板芳郎
    • 学会等名
      第86回日本動物学会
    • 発表場所
      仙台市
    • 年月日
      2015-09-17
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] TALEN法による高効率遺伝子破壊法:Xenopus laevis 卵母細胞へのmRNA注入とホストトランスファー法の応用2015

    • 著者名/発表者名
      中島圭介、矢尾板芳郎
    • 学会等名
      第9回日本ツメガエル研究集会
    • 発表場所
      秋田市
    • 年月日
      2015-09-14
    • 関連する報告書
      2015 実績報告書
  • [学会発表] 致死遺伝子のノックアウト問題の解決を目指して: TALEN による生殖細胞優先的標的遺伝子破壊法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      中島 圭介、矢尾板 芳郎
    • 学会等名
      第9回 XCIJ-MA•第8回ツメガエル研究会ジョイント研究集会
    • 発表場所
      相模原市
    • 年月日
      2014-11-28
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] TALENを用いたネッタイツメガエル生殖細胞優先的ゲノム編集技術2014

    • 著者名/発表者名
      中島 圭介、矢尾板 芳郎
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会
    • 発表場所
      横浜市
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] The role of the thyroid hormone receptor during Xenopus metamorphosis2014

    • 著者名/発表者名
      Keisuke Nakajima, Kenta Fujimoto and Yoshio Yaoita
    • 学会等名
      8th International Symposium on Amphibian and Reptilian Endocrinology and Neurobiology
    • 発表場所
      Okazaki, Japan
    • 年月日
      2014-11-07 – 2014-11-09
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] ツメガエルにおける ouro 遺伝子ノックアウト2014

    • 著者名/発表者名
      中井 裕也、中島 圭介、矢尾板 芳郎
    • 学会等名
      第85回日本動物学会
    • 発表場所
      仙台市
    • 年月日
      2014-09-11 – 2014-09-13
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] TALEN による生殖細胞特異的ゲノム編集法の開発2014

    • 著者名/発表者名
      中島 圭介、矢尾板 芳郎
    • 学会等名
      第85回日本動物学会
    • 発表場所
      仙台市
    • 年月日
      2014-09-11 – 2014-09-13
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] The development of TALEN methods to enhance the mutation efficiency and to perform genome editing preferentially in germ cells using Xenopus.2014

    • 著者名/発表者名
      Keisuke Nakajima and Yoshio Yaoita
    • 学会等名
      15th International Xenopus Conference
    • 発表場所
      Pacific Grove, CA, USA
    • 年月日
      2014-08-24 – 2014-08-28
    • 関連する報告書
      2014 実施状況報告書
  • [学会発表] The exploitation of genome editing in Xenopus tropicalis2014

    • 著者名/発表者名
      Keisuke Nakajima and Yoshio Yaoita
    • 学会等名
      Frontiers in Amphibian Biology: Endangered Species Conservation and Genome Editing
    • 発表場所
      Hiroshima University
    • 関連する報告書
      2013 実施状況報告書

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公開日: 2014-07-25   更新日: 2019-07-29  

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