| Project/Area Number |
01015076
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Cancer Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
西村 純二 九州大学, 医学部, 講師 (20112336)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柴田 恵介 九州大学, 医学部, 医員
井手口 裕 福岡大学, 医学部, 講師 (30131808)
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| Project Period (FY) |
1989
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1989)
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| Budget Amount *help |
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
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| Keywords | 慢性骨髄性白血病 / P210^<bcr@abl>蛋白 / チロシン・キナーゼ / ホスホチロシン・ホスファターゼ |
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| Research Abstract |
Ph^1転座に伴うbcr/abl fusion遺伝子に由来するP210^<bcr/abl>(P210)蛋白はチロシン・キナーゼ活性を有し、慢性骨髄性白血病(CML)の病因や急性期への進展との関係が注目される。われわれはP210機能の細胞内調節、特に分化に伴う抑制機構を明かにするために、抗ホスホ・チロシン抗体および抗abl抗体を用い、CML細胞株K562のP210を分離し、細胞内のホスホチロシン・フォスファターゼ活性(PTPase)およびチロシン・キナーゼ阻害活性(PTKーI)を検討した。
1.抗体の作製:抗ホスホ・チロシン抗体はホスホチラミンーKLH複合体を、抗abl抗体は合成ペプチド(SerーAspーGluーValーGluーLysーGluーLeuーGlyーLys)ーチログロブリン複合体をそれぞれ家兎に免疫し作製した。これらの抗体はいずれもK562細胞のP210を特異的に沈降させた。
2.PTPase活性:K562細胞より抗ホスホ・チロシン抗体にてP210蛋白を分離し、in vivoあるいはin vitroでチロシンをリン酸化させ、細胞中のPTPaseの基質とした。PTPaseは慢性期CML細胞、正常好中球に認められたが、CML細胞株K562,RMー10,Pl90^<cーabl>を発現するMR87や正常リンパ球には認められず、細胞分化にともなうP210のチロシン・キナーゼの抑制との関連が示唆された。このPTPaseはZn^<2+>でのみ阻害され、Na_3VO_4,NaF,PNPP,EDTA等では影響されなかった。また膜PTPaseであるCD45に対する抗体にても中和されなかった。
3.PTKーI活性:K562細胞より抗abl抗体にてP210蛋白を分離し、immune complex kinase assayの阻害により、PTKーIを測定した。PTKーI慢性期CML細胞、正常好中球の他にK562,RMー10,MR87にも認められたが、この活性は細胞可溶分画によるATP分解の可能性を否定できず、更に検討を要する。
成熟顆粒球PTPaseのP210キナーゼ抑制への関与が示唆される。
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