カエル卵母細胞におけるカイコ細胞質多核体病ウイルスRNA合成酵素の生成
| Project/Area Number |
01560098
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
応用生物化学・栄養化学
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
池上 晋 広島大学, 生物生産学部, 教授 (80011980)
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| Project Period (FY) |
1989
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1989)
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| Budget Amount *help |
¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | カエル / 卵母細胞 / RNA合成酵素 / カイコ細胞質多核体病 / ウイルス / 二本鎖RNA |
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| Research Abstract |
カイコ細胞質多核体病ウイルス(CPVと略称する)は10本の分節したゲノムニ本鎖RNA分子と、5種のポリペプチド、V1(分子量146K)、V2(分子量140K)、V3(分子量128K)、V4(分子量62K)、V5(分子量32K)から構成されている。ウイルス粒子には二本鎖RNAを鋳型として単鎖のmRNAを生成させるRNAレプリカ-ゼの他に、mRNAグアニリルトランスフェラ-ゼ、mRNAメチルトランスフェラ-ゼなどのキャッピング酵素が内在する。しかし、これらの酵素活性はウイルス粒子から可溶化されておらず、これらがどのペプチドに相当し、どのRNAセグメントによってフ-ドされているか明らかにされていなかった。
本研究で、CPV粒子から10本の二本鎖RNAセグメントを分離・精製し、それぞれのセグメントを[^3H]UTPと共に無核アフリカツメガエル卵母細胞に注入し、RNA合成を誘起するRNAセグメントを探査した。その結果、セグメント2および3の加熱変性RNAを注入た際に,RNA合成量が増大することが判明した。セグメント2および3がコ-ドするペプチドはV2であった。したがって、V2がRNAレプリカ-ゼに他ならないことが結論ずけられた。
本研究に関連して、イトマキヒトデ卵母細胞にCPVを注入したところ、アフリカツメガエルの場合と異なり、CPVタンパク質を生成することなく細胞は死に至ることが判明した。この致死因子は二本鎖RNAそのものであり、この二本鎖RNAによる致死作用には細胞内アクチンの重合が関与することがあきらかとなった。
さらに、RNAポリメラ-ゼ反応を阻害する新規化合物を精製、単〓し、これがホルマイシンにきわめて類似の作用をもち、アフリカツメガエル卵母細胞に注入することによってリン酸化されることが示された。
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Research Products
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