大腸菌oriCおよびforC領域を含む複合体の構造と機能

Research Project

Project/Area Number	01560117
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	発酵・醸造
Research Institution	Tokyo Institute of Technology
Principal Investigator	永井和夫東京工業大学, 生命理工学部, 教授 (00011974)
Project Period (FY)	1989 – 1990
Project Status	Completed (Fiscal Year 1990)
Budget Amount *help	¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000) Fiscal Year 1990: ¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000) Fiscal Year 1989: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Keywords	大腸菌 / 染色体複製開始 / oriC / グリコ-ゲン / グリコ-ゲン・シンタ-ゼ / 複製 / 細胞複製
Research Abstract	1、大腸菌染色体複製開始過程の温度感受性変異株PC2(dnaC2)の培養温度を変化させることにより、染色体複製に関して同調化した。複製開始直後の菌体を集め、フレンチプレス破砕,超遠心分画,塩化セシウム密度勾配遠心を経て、目的とする染色体複製開始領域(oriC領域)を含む複合体(oriC複合体)を必要量調製した。 2、1で得られたoriC複合体と、ほぼ一致する分画にグリコ-ゲンが見出され、また、分子量75Kd,55Kd,35Kdの蛋白が存在する。この中55Kd蛋白については、N末10残基のアミノ酸配列から、グリコ-ゲン・シンタ-ゼ(GS)と推定された。 3、2の推定の当否を検証するために、GS欠損(glgA^ー)とdnaCとの2重変異株を調製し、この株より1の方法に従ってoriC複合体を分離した。 4、3で得られたoriC複合体区分にはグリコ-ゲンおよび55Kdの蛋白が認められず、また、同時に75Kd,35Kdの蛋白も検出されなかった。この結果から、55Kdの蛋白がGSであることが証明され、また、75Kd、35Kdの蛋白もグリコ-ゲン合成関連のものであることが示唆された。 5、oriC複合体中に含まれる蛋白の解析を目的として、蛋白調製法を改変しSDSーポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で検討したところ、新たに、分子量17Kdの蛋白がDNAと同じ位置に沈降することを見出した。