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簡便な器官培養法を用いたヒト組織の細胞動態

Research Project

Project/Area Number 01570177
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Human pathology
Research InstitutionHamamatsu University School of Medicine

Principal Investigator

中村 真一  浜松医科大学, 医学部, 助教授 (20107816)

Project Period (FY) 1989
Project Status Completed (Fiscal Year 1989)
Budget Amount *help
¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Keywords細胞動態 / DNA合成 / S期 / BrdU / オ-トラジオグラフィ- / 標識率
Research Abstract

ディスポ-ザブルシリンジを用いた器官培養法:生検材料、手術摘出材料、術中迅速材料から、剃刀を用いて1mm以下に薄切した材料を採取し、20mlのディスポ-ザブルシリンジ(ニプロ)に、注射針(18G、ニプロ)をつけ、Brd U(200μM、Sigma社)添加RPMI 1640培地(日水製薬)を約10ml吸引する。薄切材料をシリンジ内にいれ、内筒を元に戻してシリンジ内を培養液と材料だけにする。次に注射筒の針先から酸素を入れ、注射針をはずし、手製のアルミ製ホルダ-(厚さ、1.2mm)にシリンジの先端を押し付け、内筒を押して加圧する。酸素を1/3の体積に圧縮すると3気圧が得られる。ホルダ-を37℃の恒温水漕(大洋科学、Mini-80)に漬け、1時間振盪培養する。材料は70%エタノ-ル固定する。パラフィン包埋後3μn薄切標本を作成。脱パラフィン後、4NHCLで30分間処理し2本鎖DNAを1本鎖とした後、0.1MNa_2B_4O_7で中和した。抗BrdU抗体(Becton・Dickinson)を用いた酸素抗体法でDNA合成期の細胞を検索した。
標識結果の検討:生検材料、手術材料、術中迅速材料の新鮮材料は新鮮なほど良い結果が得られたが、摘出後直ちに培養液に入れ4℃に保存すれば、4〜5時間後でも十分な標識像が得られた。先天性横紋筋肉腫の皮膚転移腫瘍細胞の標識率は24%であった。表皮や皮膚付属器ではごく稀に標識細胞が認められた。手術摘出消化管の検索では、進行胃癌20例中15例、進行大腸癌8例全例、また直腸癌5例中4例で、びまん性の標識細胞の分布像が観察できた。進行癌の症例では、癌細胞が漿膜下まで浸潤し、粘膜、粘膜下、固有筋層、漿膜下と浸潤癌細胞に標識がびまん性に観察されたものがあった。標本も大きく外科材料の半分ほどでも、十分な標識が可能であった。本法は我々がすでに報告したex vivo autoradiographyに匹敵する標識方法を考えられる。

Report

(1 results)
  • 1989 Annual Research Report
  • Research Products

    (2 results)

All Other

All Publications (2 results)

  • [Publications] 中村真一: "簡便な器官培養法を用いた消化管腫瘍の細胞動態" 日病会誌. 77. 220 (1988)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] 中村真一: "簡便な器官培養法を用いたヒト組織の細胞動態" 病態生理. 9. 157-160 (1990)

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      1989 Annual Research Report

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Published: 1989-04-01   Modified: 2016-04-21  

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