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酵母におけるERーゴルジ間輸送の分子機構

Research Project

Project/Area Number 01580185
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 代謝生物化学
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

中野 明彦  東京大学, 理学部, 講師 (90142140)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大矢 禎一  東京大学, 理学部, 助手 (20183767)
Project Period (FY) 1989 – 1990
Project Status Completed (Fiscal Year 1990)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1990: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywordsタンパク質の分秘 / 小胞体(ES) / ゴルジ体 / 小胞輸送 / GTP結合タンパク質 / SARI / SEC12 / 酵母(S.cerevisial) / タンパク質の分泌 / 小胞体(ER) / 細胞内小胞輸送 / SAR1 / 酵母(S.cerevisiae)
Research Abstract

酵母遺伝子SARIは,ERーゴルジ体間輸送に温度感受性の欠陥をもつ sec12変異株のマルチコピ-サプレッサ-として分離されたものであり,その抑圧の機構は産物レベルでの相互作用によるものと推定されている.その産物Sarlpについては、これまでに,分子量21KDのGTP結合タンパク質であること,それ自身がERーゴルジ体間輸送に必須であること,そして細胞内では主に小胞体膜に局在するが可溶性のも存在することを示してきた.本年度は,さらにERーゴルジ体間輸送の無細胞系を用い,以下のことを明らかにした.
酵母のin vitro ERーゴルジ体間輸送を,Bakerらの報告に基づき,α因子の糖鎖修飾を指標として確立した.この反応で,sec12変異株より調製したsemiーintact cells(膜画分)は,in vitroでもin vivoと同様に温度感受性を示した.この系にSarlp過剰生産株より調製した細胞質可溶性画分を加えたところ,sec12膜の温度感受性はほぼ完全に抑圧された.この抑圧効果はSarlp自身によるものであることが示されたので,in vivoにおけるSarlpの生理活性をin vitroで再現できたものと考えられる.野生型およびGTP非結合型の変異Sarlpを大腸菌で作らせたところ,野生型Sarlpのみが活性を示した.また,GTPの非分解アナログであるGTPγSを結合した野生型Sarlpも活性をもたなかった.つまり,SarlpのERーゴルジ間輸送の機能には,GTPの結合とその水解が必須であることが示唆された.

Report

(2 results)
  • 1990 Annual Research Report
  • 1989 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All Other

All Publications (6 results)

  • [Publications] Shuhーichi Nishikawa and Akihiko Nakano: "The GTPーbinding Sari protein is localized to the early compartment of the yeast secrctory pathway." Biochim.Biophys.Acta.

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] C.d'Enfert,C.Barlowe,S.Nishikawa,A.Nakano,and R.Schekman: "Functional dissection of Sec12p and evidence for its interaction with a small GTPーbinding protein"

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] T.Oka,S.Nishikawa and A.Nakano: "GTPーdependent reconstitution of the Sorl protein function in vitro:transport from the endoplasmic reticulum to the Golg:apparatus."

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Akihiko Nakano and Masaki Muramatsu: "A Novel GTP-binding Protein,Sar1p,is Involved in Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Golgi Apparatus" J.Cell Biol.109. 2677-2691 (1989)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Shuh-ichi Nishikawa and Akihiko Nakano: "Subcellular Localization of Sar1p Reqwired for ER-Golgi Transport in Yeast" Cell Struct Funct.14. 927 (1989)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Akihiko Nakano and Shuh-ichi Nishikawa: "A Novel GTP-binding Protein,Sar1p,Cooperates with Sec12p in Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Golgi Appartus" J.Cell Biochem,Suppl.14C. 63 (1990)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report

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Published: 1989-04-01   Modified: 2016-04-21  

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