家族性大腸ポリポ-ジスにおける発癌機構の解析

• Project/Area Number: 02151020
• Research Category: Grant-in-Aid for Cancer Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 外村 晶 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (30013808)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森 武貞 大阪大学, 医学部, 教授 (60028496) ; 笹月 健彦 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (50014121) ; 宮木 美知子 東京都臨床医学総合研究所, 腫瘍生化学研究室, 研究室長 (20085624) ; 池内 達郎 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教授 (90041839) ; 岩間 毅夫 東京医科歯科大学, 医学部・ポリポージス腸疾患研究センター, 助教授 (70114741)
• Project Period (FY): 1988 – 1990
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1990)
• Budget Amount: ¥8,500,000 (Direct Cost: ¥8,500,000); Fiscal Year 1990: ¥8,500,000 (Direct Cost: ¥8,500,000)
• Keywords: 家族性大腸ポリポ-ジス / 染色体異常 / 対立遺伝子のヘテロ接合型消失 / 大腸癌培養細胞への単一染色体移入 / 大腸関連癌遺伝子のcDNAクロ-ニング / マイクロ波固定癌組織のインサイチュウハイブリダイゼ-ショ

Research Abstract

1.家族性大腸ポリポ-シス(以下,FAPと略す)患者およびその家系構成員より末梢血,ポリ-プ,大腸癌等の試料を採取し,班員に配布した(岩間,宇都宮)。末梢血の一部はEBVを用いてリンパ芽球細胞株を樹立し,凍結保存した(池内)。
2.大腸癌3例,腺腫8例とデスモイド腫瘍1例の染色体分析を行なった。腺腫は1個ずつ別々に培養したが,小形の場合は何個かずつまとめて培養した。いずれの場合も,7,13,20番染色体のトリソミ-と20,22番のモノソミ-が特徴的であった(外村,池内)。
3.17pのp53遺伝子について調べたところ,対立遺伝子欠失とエキソン5〜8の点突然変異をともに有する浸潤癌が7例見いだされたので,癌ではp53遺伝子は不活性されていると推測された。一方,大腸癌培養細胞に正常体細胞由来の5,18番染色体をそれぞれ単一に移入したところ,ヌ-ドマウス移植性が消失し,癌形質の抑制が起こることが判明(宮木,押村)。
4.p53遺伝子のヘテロ接合性の消失(LOH)が腺腫で23例中4例(17%),大腸癌で9例中5例(56%)に検出された。また18g上のDCC遺伝子のLOHを検索した結果,腺腫で21例中6例(29%),大腸癌で3例中2例(75%)に認められ,大腸癌発生過程にこれらの遺伝子の関与が示唆された(笹月)。
5.ヌ-ドマウスを使う方法により,FAP患者細胞DNAから得られた癌遺伝子のcDNAクロ-ニングに成功した。一部,DNA塩基配列を決定し,ホモロジ-検索を行なったところ,Bーraf遺伝子と同一であった。cDNAの5′側はBーraf protoーoncogeneの配列とは異なっていたので,再配列が起こっているものと考えられた(湯淺)。
6.マイクロ波(MW)照射によって固定した26の大腸癌の癌遺伝子の発現を調べたところ,6例にHaーras m RNA,7例にKiーras m RNA,12例にCーmyc m RNAが検出され,免疫組織化学的手法の結果と一致した(森)。

Research Products

• [Publications] <Miyaki,M.>___ー,Seki,M.,Okamoto,M.Yamanaka,A.,Maeda,Y.,Tanaka,K.,Kikuchi,R.,<Iwama,T.>___ー,<Ikeuchi,T.>___ー,<Tonomura,A.>___ー,Nakamura,Y.,White,R.,Miki,Y.,<Utsunomiya,J.>___ー,& Koike,M.: "Genetic Changes and Histopathological Types in Colorectal Tumors from Patients with Familial Adenomatous Polyposis." Cancer Research. 50. 7166-7173 (1990)
• [Publications] Okamoto,M.,Sato,C.,Kohno,Y.,Mori,T.,<Iwama,T.>___ー,<Tonomura,A.>___ーMiki,Y.,<Utsunomiya,J>___ー.,Nakamura,Y.,White,R.& <Miyaki,M>___ー.: "Molecular nature of chromosome 5q loss in colorectal tumors and desmoids from patients with familial adenomatous polyposis." Human Genetics. 85. 595-599 (1990)
• [Publications] Sasaki,M.,Sugio,K.,<Sasazuki,T.>___ー: "Kーras Activation in Colorectal Tumors From Patients With Familial Polyposis Coli." Cancer. 65. 2576-2579 (1990)
• [Publications] <Yuasa,Y.>___ー,Kamiyama,T.,Kato,M.<Iwama,T.>___ー,<Ikeuchi,T.>___ー& <Tonomura,A.>___ー: "Transforming genes from familial adenomatous polyposis patient cells detected by a tumorigenicity assay." Oncogene. 5. 589-596 (1990)
• [Publications] Murotani,M.,Morimoto,H.,Monden,T.,Higashiyama,M.,Kawasaki,Y.,Shimano,T.& Mori,T.: "Application of microwave(MW)ーfixed tissue samples to in situ hybridization: Detection of carcinoembryonic antigen(CEA) m RNA and oncogene transcripts in MWーfixed colorectal carcinomas using sulfonated probes." Acta Histochem.Cytochem.23. 335-349 (1990)
• [Publications] Hoshino,Y.,Horikawa,I.,<Oshimura,M.>___ー& <Yuasa,Y.>___ー: "Normal human chromosome 5,on which a familial adenomatous polyposis gene is located,has tumor suppressive activity." Biochemical and Biophysical Research Communications.
• [Publications] <Iwama,T.>___ー,Mishima,Y.& <Utsunomiya,J.>___ー: "Current Status of the Registration of Familial Adenomatous Polyposis at the Polyposis Center in Japan.In Utsunomiya,J.Lynch,H.T.(eds.):“Hereditary Colorectal Cancer",p63ー69." SpringerーVerlag Tokyo, 575 (1990)
• [Publications] <Ikeuchi,T>___ー.,Yoshida,M.A.,<Iwama,T>___ー.,<Miyaki,M.>___ー,Okayasu,I.& <Tonomura,A.>___ー: "Cytogenetic Studies on Colon Carcinomas and Adenomas from Patients with Familial Polyposis Coli.In Utsunomiya,J.,Lynch,H.T.(eds.):“Hereditary Colorectal Cancer",p533ー540" SpringerーVerlag Tokyo, 575 (1990)