| Project/Area Number |
02250224
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
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| Project Period (FY) |
1990
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1990)
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| Budget Amount *help |
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 1990: ¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
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| Keywords | 蛍光標識 / ウズラ / 酵素 / マンノシダ-ゼ / HPLC |
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| Research Abstract |
αーマンノシダ-ゼの基質特異性をピリジルアミノ(PAー)糖鎖を基質として用いて解析し、酸素の役割等について調べるため、平成2年度に得られた知見について報告する。
1)PAー糖鎖調製のためピリジルアミノ化反応を再検討し、定量的に反応が進行する様にした。
2)基質の調製:オボアルブミンや大福豆より21種類のオリゴマンノ-ス型のPAー糖鎖を調製しHPLCで分離する条件が得られた。
3)PAー糖鎖を用いた活性測定は次の様に行なった:酸素反応混合物をサイズフラクショネ-ションHPLCで各ピ-クを分取し、各々ピ-クはさらに逆相HPLCで分離して、酸素消化物を固定した。
4)ニホンウズラの輸卵管をホモジナイズし、30,000xg上澄を粗酵素液とした。硫安沈殿、DEAEーSephacel,Sephacryl Sー300,mannannーSepharose 4B,hydroxyapatiteカラムクロマトグラフィ-で精製しSDSーPAGEとPAGEで単一のバンドを示す標品を得た。得られた酵素はコバルトイオンを要求し、分子量330,000、至適pH7.0の酵素であった。
4)ウズラ中性αーマンノシダ-ゼはManα1ー3,Manα1ー6残基を水解しManα1ー2残基は水解しにくい事が明らかになった。さらに詳細な解析を行なう予定である。
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Report
(1 results)
Research Products
(7 results)
