補体C9のレセプタ-(C5bー8)への結合部位に関する研究

• Project/Area Number: 02671076
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Laboratory medicine
• Research Institution: Osaka Medical College
• Principal Investigator: 畑中 道代 大阪医科大学, 医学部, 助手 (50218484)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 稲井 真弥 大阪医科大学, 医学部, 教授 (90131317)
• Project Period (FY): 1990
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1990)
• Budget Amount: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 1990: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
• Keywords: 補体C9 / レセプタ- / モノクロ-ナル抗体 / エピト-プ

Research Abstract

C9は膜上に形成されたC5bー8に結合後,立体構造が大きく変化し,膜上での高分子ポリマ-を形成し機能を発現する.我々は,C5bー8への結合を阻害することにより,C9の溶血活性を阻害する抗C9抗体(P40,X197)を得ている.本研究では,C9の構造と活性発現との関係を明らかにすることを目的とし,これらの抗体の認識するエピト-プの検索を行った.精製ヒトC9を種々の方法でフラグメントに断片化し,SDSゲル電気泳動後,ニトロセルロ-ス膜に転写した.各モノクロ-ナル抗体と反応させた後, ^<125>Iで素識した抗マウスIgGを反応させ各モノクロ-ナル抗体が認識するフラグメントをオ-トラジオグラフィ-で検出した.これらの実験から以下の結果が得られた.1.P40,X197はともにαースロンビン分解で得られるC9bを認識した.2.P40,X197はともにトリブシン分解で得られるC9b'を認識した.3.C9bをBNP Sーskatole分解して得られる2つのフラグメントのうちP40はC9bNを,X197は両者を認識した.4.C9の1次構造上の385ー408の配列の合成ペチプドは両抗体と反応しなかった.このペプチドをウサギに免疫して得られた抗体は,C9の溶血活性を阻害しなかった.これらの結果から,P40の認識するエピト-プは3つの方法によるエピト-プマッピングで共通の認識部位,392ー437の配列に存在することがわかった.X197はP40に近接した部位を認識しているが,さらにC末側をも認識している可能性が高い.本研究で明らかになった,P40,X197の認識部位はC末に近いドメイン5に存在しており,この部位がC9のC5bー8への結合に重要であると考えられる.

Research Products

• [Publications] 畑中 道代: "モノクロ-ナル抗C9抗体を用いたC9のC5bー8への結合部位の検索" Proceeding of the Complement Symposium. 27. 130-131 (1990)