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生理活性ペプチド,エンドセリンの受容体サブタイプの解析と精製

Research Project

Project/Area Number 02671102
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 内分泌・代謝学
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

高柳 涼一  九州大学, 医学部, 助手 (30154917)

Project Period (FY) 1990 – 1991
Project Status Completed (Fiscal Year 1991)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1991: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1990: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Keywordsエンドセリン / サラホトキシン / 受容体 / アフィニティ-クロマトグラフィ- / クロ-ニング / サブタイプ
Research Abstract

1.ヒトおよびブタ各組織におけるエンドセリン(ET)受容体サブタイプの解析:ヒトおよびブタ各組織より調製した膜標品を用いてのAffinity labelingと結合実験の結果,各組織には主として2つの型のET容体,即ちETー1,ETー2に親和性を有するETー1/ETー2特異受容体(ET_A)とET isopeptide全てに親和性を有するET family共通受容体(ET_B)が部位特異的に分布していることを見い出した.即ち,心血管系では主としてET^A受容体、脳、副腎、腎では主としてET_B受容体、肺では両者が分布していた。また、血管系では内皮上にET_B受容体、平滑筋上にET_A受容体が局在、各々、弛緩と収縮に連関しており,血管でのET受容体サブタイプの機能分化を証明した。
2.エンドセリン(サラホトキシン)アフィニティ-クロマトグラフィ-の開発:種々のET及びET類似ペプチドのサラホトキシン(SRT)の誘導体を合成、SRTの4位のリジンをbiocytinと置換したペプチド、[Bio^4]SRTが最適リガンドであることを見いだし、アビジンを介してアガロ-スに架橋し、[Bio^4]SRTカラムを作成、可溶化受容体の結合、解離に成功した。
3.ウシ脳のET_B受容体の精製し一部アミノ酸構造の決定:[Bio^4]SRTカラムとさらにゲル濾過によりウシ脳よりET_B受容体蛋白を得た。分子量は50Kであった。プロムシアン断片ペプチドより一部アミノ酸構造を決定した。
4.ヒトET_B受容体cDNAのクロ-ニングによる一次構造の決定:ウシ脳と肺からの精製ET_B受容体の一部アミノ酸構造を基にオリゴヌクレオチドプロ-ブを合成,ヒト肝のcDNA libraryよりET_B受容体をクロ-ニング、その一次構造を決定、さらにCOS細胞で発現させ、結合特異性を検討した。さらに、他の受容体サブタイプのクロ-ニングを試みている。

Report

(2 results)
  • 1991 Annual Research Report
  • 1990 Annual Research Report
  • Research Products

    (13 results)

All Other

All Publications (13 results)

  • [Publications] R.Takayanagi: "Regional distribution of endothelin receptor in porcine cardiovascular tissues" Regulatory Peptides. 27. 247-255 (1990)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] R.Takayanagi: "Multiple subtupes of endothelin receptors in porcine tissues:characterization by ligand binding,affinity labeling and regional distribution" Regulatory Peptides. 32. 23-37 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] C.Takasaki: "Structureーactivity relationships of sarafotoxins:chemical synthesis of chimera peptides of sarafotoxin S6b and S6c" European Journal of Pharmacology. 198. 165-169 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] R.Takayanagi: "Presence of nonーselective type of endothelin receptor on vascular endothelium and its linkage to vasodilation" FEBS Letters. 282. 103-106 (1991)

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      1991 Annual Research Report
  • [Publications] R.Takayanagi: "Multiple subtypes of endothelin receptors in human and porcine tissues:characterization by ligand binding,affinity labeling and regional distribution" Journal of Cariovascular Pharmacology. 17(Supp7). S127-S130 (1991)

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      1991 Annual Research Report
  • [Publications] M.Nakamuta: "Cloning and sequence analysis a cDNA encoding human nonーselective type of endothelin receptor" Biochem.Biophys.Res.Commun.177. 34-39 (1991)

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  • [Publications] R.Takayanagi: "Multiple subtypes of endothelin receptors in porcine tissues:characterization by ligand binding,affinity labeling and regional distribution" Regulatory Peptides. 32. 23-37 (1991)

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  • [Publications] R.Takayanagi: "Multiple subtypes of endothelin receptors in human and porcine tissues:ligand binding,affinity labeling and regioanl distribution" Journal of Cardiovascular Pharamacology. (1991)

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  • [Publications] R.Takayanagi: "Presence of nonーselective type of endothelin receptor on vascular endothelium and its linkage to vasodilation" FEBS Letters. (1991)

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  • [Publications] 高柳 涼一: "ブタ各組織におけるエンドセリン受容体サブタイプの検討" 日本臨床代謝学会記録. (1991)

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  • [Publications] C.Takasaki: "Structureーactivity relationships of sarafotoxins:Chemical syntheses of chimera peptides of sarefotoxins S6b and S6c" European Journal of Pharamacology. (1991)

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  • [Publications] K.Ohnaka: "Cultured bovine endothelial cells convert big endothelin isopeptides to mature endothelin isopeptides" Biochemistry International. (1991)

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  • [Publications] 高柳 涼一: "エンドセリンー最新情報「ブタ各組織におけるエンドセリン受容体サブタイプの解析」" 中外医学社, 179 (1990)

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      1990 Annual Research Report

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Published: 1990-04-01   Modified: 2016-04-21  

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