蛋白質のアミノ未端プロセシングに関与する酵素系の解明とその生理的役割

Research Project

Project/Area Number	02680135
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	物質生物化学
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	綱沢進大阪大学, たんぱく質研究所, 助教授 (30029962)
Project Period (FY)	1990
Project Status	Completed (Fiscal Year 1990)
Budget Amount *help	¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000) Fiscal Year 1990: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Keywords	プロセシング / アセチル化 / イニシエ-タ-メチオニン / Nーアセチルトランスフェラ-ゼ / メチオニンアミノペプチダ-ゼ
Research Abstract	イニシエ-タ-メチオニン(Met^i)に続くアミノ酸を20種のアミノ酸に変えたパン酵母シトクロムOの変異体でのN末端プロセシングの研究より,真核細胞でのN末端プロセシングの様式がほぼ解明され,N未端プロセシングには少くとも3種の酵素;メチオニンアミノペプチダ-ゼ(MAD)ならびに2秒のNーアセチルトランスフェラ-ゼ(NAT1およびNAT2);が作用することが明らかになった。そこで本研究では,これら3種の酵素をパン酵母より単離することを試みた。NAT1については,既にパン酵母変異株より本酵素の欠損株が得られその遺伝十構造が解明されていたので,これをプラミドに挿入し,本酵素の合成を増巾させた菌株を用い,NA+2およびMAPについては,主なプロテア-ゼが欠損したパン酵母菌株を使用した。この結果,NAT1は,分子量約95,000の同一サブユニットよりなるタンパク質で,PH8付近にその至適pHを示し,特にN未端セリン,アラニンのアセチル化に特異性を示す酵素であること,NAT2は,分子量約75,000のタンパク質で,N未端MetーGluーおよびMetーAspーに対してアセチル化を触媒する酵素であること,MAPは分子量約30,000のタンパク質で,Ca^<2+>あるいはMn^<2+>によって活性化される金属酵素でその至適pHは7〜8であること等が明らかになった。今後はこれら3種の酵素についてその完全な精製と構造解析を進めて行く。