新しいcDNA発現ベクタ-を用いた遺伝病における欠損遺伝子のクロ-ニング

Research Project

Project/Area Number	02808037
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	放射線5生物学
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	早川浩九州大学, 医学部, 助手 (70150422)
Project Period (FY)	1990
Project Status	Completed (Fiscal Year 1990)
Budget Amount *help	¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000) Fiscal Year 1990: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Keywords	クロ-ニング / 発現ベクタ- / cDNA / 遺伝病 / DNA修復
Research Abstract	1色素性乾皮症F群遺伝子のクロ-ニングヒト末梢血細胞ならびに各種ヒト由来細胞から作成したcDNAライブラリ-をSV40ウイルスでトランスフォ-ムされた色素性乾皮症F群細胞,XP2YO(SV)にエレクトロポレ-ションで導入しライブラリ-上の選択マ-カ-であるハイグロマイシン耐性遺伝子を用いcDNAライブラリ-を十分にカバ-する多数のトランスフォ-マントを分離した。さらにこれらの細胞に紫外線照射を繰り返し紫外線に抵抗性の12系統を得た。これらの細胞は対照区でそのような2重耐性株が現われていないことから復帰突然変異株である可能性は低いと期待できる。これらの細胞の多くはXP2YO(SV)とHeLa S3細胞のほぼ中間の紫外線感受性を示し、それらの細胞中には複数個のcDNAを有していることが明かとなった。現在PCRにより増幅されたこれらcDNAを発現ベクタ-に再クロ-ニングし目的である色素性乾皮症F群細胞の遺伝子欠損を相補するようなcDNAであるかどうかの確認を進めている。 2ファンコニ-貧血症患者に欠損する遺伝子を相補するcDNAクロ-ニング各種cDNAライブラリ-をEBウイルスでトランスフォ-ムした患者由来の末梢血リンパ細胞株、HSC99に導入し1と同様あらかじめハイグロマイシン耐性のトランスフォ-マントを分離後さらにマイトマイシンCによる選択をおこない2重耐性株を数系統分離した。それらの細胞中1系統でcDNAを有するものがみつかった。この系統は親株であるHSC99と正常細胞株のほぼ中間のマイトマイシンC感受性を示す。現在このcDNAを発現ベクタ-に再クロ-ニングしファンコニ-貧血症患者に欠損する遺伝子を相補するようなcDNAであるかどうかの確認を急いでいる。