神経系で特異的に発現しているタキキニン遺伝子の転写制御因子の解析

Research Project

Project/Area Number	03254205
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	影山龍一郎京都大学, 医学部, 助教授 (80224369)
Project Period (FY)	1991
Project Status	Completed (Fiscal Year 1991)
Budget Amount *help	¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000) Fiscal Year 1991: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Keywords	転写制御因子 / 神経分化 / 神経機能 / サブスタンスP / cAMP反応領域 / タキキニン
Research Abstract	サブスタンスPやサブスタンスKなどのタキキニン・ペプチドは神経系で重要な役割を果たし、その遺伝子は神経系で特異的に発現している。我々はタキキニン遺伝子のプロモ-タ-を単離し、そこにはTGCGTCAというcAMP response element (CRE)が存在することを明らかにした。さらにUVクロスリンクの解析からこのCREの領域に新しい因子が結合することを見出したので以下の解析を行った。タキキニン遺伝子のプロモ-タ-のCREの配列をプロ-ブに用いてラット脳入gtll cDNAライブラリ-をサウスウエスタン法によりスクリ-ニングを行った。その結果、新しい因子をコ-ドした陽性クロ-ンを得た。この因子はCATボックス・エンハンサ-結合蛋白(C/EBP)と高い相同性のある塩基性領域とロイシン・ジッパ-構造をC末側に持っていたのでCELFと名付けた。N末側の領域においては、CELFと他の因子との間には全く相同性は見られなかった。DNaseIフットプリンティング法によりDNA結合能をみたところ、CELFはタキキニン遺伝子のCRE領域に非常に強く結合した。また、CELFは他のCRE結合因子子とは異なり、Aキナ-ゼによるリン酸化修飾を受けず、さらに無細胞転写系においてCRE依存性に転写亢進作用を示した。以上の結果から、CELFはcANP非依存性に転写活性を持つCRE結合因子であることが明らかになった。次に、ノザン解析によりCELFのmRNAの組識発現分布をしらべたところ、脳、肝、腎などの種々の臓器で発現が見られた。このことは、CELFはタキキニン遺伝子だけでなく他の多くの遺伝子発現の制御に関与していることを示唆している。