| Project/Area Number |
03454502
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
応用薬理学・医療系薬学
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
菱沼 隆則 東北大学, 医学部附属病院, 講師 (20199003)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
水柿 道直 東北大学, 医学部附属病院, 教授 (60004595)
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| Project Period (FY) |
1991 – 1992
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1992)
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| Budget Amount *help |
¥6,000,000 (Direct Cost: ¥6,000,000)
Fiscal Year 1992: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1991: ¥4,600,000 (Direct Cost: ¥4,600,000)
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| Keywords | プロスタグランジン / モノクローナル抗体 / GC / MS / Δ^<17>-6-keto-PGF^<1d> / エイコサペンタエン酸 / モノクロ-ナル抗体 |
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| Research Abstract |
エイコサペンタエン酸(EPA)は、体内でアラキドン酸カスケードにより代謝され種々の3型プロスタグランジン(PG)に変換される。これら3型PGは微量かつ不安定であるが、EPAの生理学的意義を解明するには3型PGの超微量定量法を確立することが必要である。そこで、今回、GC/MSを用いた生体試料中の3型PGの超微量定量法の確立とその検出量の評価を行なうため、迅速かつ簡便な前処理法を可能とする、抗3型PGモノクローナル抗体の作製を行った。
本研究では3型PGとして、抗血小板凝集作用を有するPGI_3の安定代謝体Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>を対象とした。EPAの牛大動脈内皮細胞を用いた生物変換を行い、約120μgのΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>を得た。同化合物を^<18>O標識化し、得られた^<18>O標識体を内部標準物質として用いる、GC/SIMによる超微量定量法を確立した。つぎに、生体試料中からの3型PGの抽出を迅速にかつ簡便にするため3型PGに対するモノクローナル抗体の作製を行った。すなわち2型と3型の構造の相違である17位のcis二重結合に着目し、同部位のモデル化合物cis-3-hexen-1-olとヒト血清アルブミン(HSA)との結合体を免疫原として特異抗体を作製した。得られたモノクローナル抗体は3型PGと高い反応性を有し、同抗体を用いて作製した抗体カラムは、迅速かつ簡便なΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>の抽出を可能にした。本法を用いる時、健常人の血中から20-80pg/mlのΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>が検出された。さらに、Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>に対するモノクローナル抗体を同様に作製した。同抗体は、Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>との高い反応性を有するため、本抗体を用いた生体試料中のΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>の回収や濃縮を前処理法とするGC/SIM法や、RIAやEIAを用いた直接定量により、各種疾患に伴う含量変化等の検討が可能になるものと考えられる。
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