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緑膿菌の産生するエラスタ-ゼ、アルカル性プロテア-ゼの分子遣伝学的検討

Research Project

Project/Area Number 03670219
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 細菌学
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

奥田 研爾  横浜市立大学, 医学部, 教授 (40124862)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 福島 淳  横浜市立大学, 医学部, 助手 (00181256)
川本 進  横浜市立大学, 医学部, 講師 (80125921)
Project Period (FY) 1991
Project Status Completed (Fiscal Year 1991)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1991: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords緑膿菌 / エラスタ-ゼ / アリカリ性プロテア-ゼ / 遣伝子操作 / 遣伝子発現 / 構造
Research Abstract

今まで緑膿菌エラスタ-ゼ(以下PE)の遣伝子を釣り上げ、一次構造を決定したが、今回はPEの高次構造をX線解析及びcomputergraphicを使用して研究を行った。X線解析は、阪大蛋白研勝部教授と行っていたが、gallowayらが(Biochemistry1991年)報告したので、我々は途中で中止し、このCompitergraphicの研究を行い、サ-モリシンと極めて類似していることが判明し、現在投稿中である。
PE非産生の緑膿菌であるIFO3080株、PA103株、N‐10株について、まずその変異株のPE構造遣伝子のクロ-ニングを行なった。これら3つの野生株よりPEの遣伝子を釣り上げ、pEL3080R、pEL103R、pEL10と名付けた。これらプラスミドで形質転換したE、coli菌株についてエラスチン活性を測定したところ、E、Coli pEL103RとE、coli pEL10に活性があり、E、Coli pEL3080Rには活性が無かった。更にこの3つの変異株のエラスタ-ゼ構造遣伝子の塩基配列を決定し、PE産生株であるIFO3455株のエラスタ-ゼ構造遣伝子と比較してみた。N‐10株とPA103株については、わずかな塩基配列の違いを除いて、ほぼ同じであり、この2つの構造遣伝子は正常であると考えられ、緑膿菌体内でのPEの産生はこの遣伝子の発現が抑制されていることが考えられた。IFO3080株のエラスタ-ゼ構造遣伝子の塩基配列はIFO3455株と比べたPE構造遣伝子中に1塩基(627番)の欠損があるため、その以降のアミノ酸配列がフレ-ムシフトにより変異していた。しかし、今のところP.aeruginasa IFO3080株のエラスチン分解活性及びウエスタンブロッティングにおいて上述のような結果となったことは明らかではなかった(J、Bacteriol.1991)。現在、アルカリ性プロテア-ゼの非産生株より遣伝子を釣り上げ、その遣院子構造を解析している。

Report

(1 results)
  • 1991 Annual Research Report
  • Research Products

    (5 results)

All Other

All Publications (5 results)

  • [Publications] OKuda,K.,Morihara,K.,Takeuchi H.,Fukushima,J.,et al.: "Comolete nucleotide sequence of the structural gene for alkaline proteinase from Pseudomonas aeruginasa IFO 3455" Infection and Immunity. 58. 4083-4088 (1990)

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      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Fukushima,J.,Takeuchi,H.,Tanaka,E.,Okuda,K.,et al.: "Molecular cloning and partial DNA sequencing of the collagenase gene of Vibrio alginolyticus." Microbiol.Immunol.34. 977-984 (1990)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Tanaka,E.,Kawamoto,S.,Fukushima,J.,Hamajima,K.,Okuda,K.,et al.: "Detection of elastase production in Escherichia coli with the elastase structural gene from several non‐elastase‐producing strains of Pseudomonas aeruginosa." J.Bacteriology. 173(19). 6153-6158 (1990)

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      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Inami,S.,Taniguchi,N.,Ishibashi,K.,Nagao,T.,OKuda,K.,et al.: "Serum antibody directed against synthetic peptides derived from HIV‐1 individuals." AIDS. 5(9). 1140-1141 (1991)

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      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Takeuchi,H.,Shibano,Y.,Morihara,K.,Fukushima,J.,Okuda,K.,et al.: "Structural gene and complete amino acid sequence of Vibrio alginolyticus collagenase." Biochem.J.281. 703-708 (1992)

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      1991 Annual Research Report

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Published: 1991-04-01   Modified: 2016-04-21  

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