トランスジェニックマウスを用いた神経ペプチドの生理的,病態生理的意義に関する研究

• Project/Area Number: 03671152
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 内分泌・代謝学
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 乾 明夫 神戸大学, 医学部, 助手 (80168418)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 徳久 剛史 神戸大学, 医学部, 教授 (20134364)
• Project Period (FY): 1991
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1991)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 1991: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
• Keywords: トランスジェニックマウス / neuropeptide Y / 神経ペプチド

Research Abstract

1.マウス神経ペプチドcDNAのクロ-ニング
ラットneuropeptide Y(NPY)cDNAをプロ-グとして,マウス脳cDNAライブラリ-よりクロ-ニングを行なったが,NPY cDNAの一部構造しか得ることができなかった。そこでPCR法を用いて,NPY及びcholeystokinin(CCK)のcDNAクロ-ニングを行い,目的とするcDNAを得た。マウスのペプチド及びcDNAはその構造の判明していないものが多く,NPY cDNAについてはシ-クエンスを行なった。
2.マウスNPY遺伝子のクロ-ニング
ラットNPY cDNAをプロ-ブとして,マウスジェノミックライブラリ-のスクリ-ニングを行い 陽性のクロ-ンを得た。NPYゲノムの時に5^1側の十分に長いクロ-ンを選択し 現在構造解析中である。
3.プロモ-タ-の入手
3種類のプロモ-タ-の投与をうけることができた。Th_<ー1>ー1は中枢神経系に,GRFな視床下部に,そしてH2は全身全組織に過剰発現させることを目的とする。
4.コンストラクション,トランスフェクション
NPY cDNAとTh_<ー1>ー1プロモ-タ-の組みあわせを最初に行い COS細胞にトランスフェクトさせた。
5.マウス受精卵への注入
現在,NPY cDNAの受精卵への注入を終了したところである。