| Project/Area Number |
04152061
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Cancer Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
志田 壽利 京都大学, ウイルス研究所, 助教授 (00144395)
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| Project Period (FY) |
1992
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1992)
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| Budget Amount *help |
¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
Fiscal Year 1992: ¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000)
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| Keywords | HTLV-I / Rex / 細胞相同体 / クローニング |
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| Research Abstract |
HTLV-IのRexは核や核小体に存在し、HTLV-I mRNAのスプライシングや核から細胞質への輸送の制御を行っている。RexのN末端に対する抗体で、Rexの感染していない細胞の核小体が染色されることから、Rexの相同体が存在することを予想した。
Rex相同体のcDNAをクローニングするために、この抗体をアフィニティー精製してから、λZapIIを用いたCV1細胞cDNAのライブラリーをスクリーニングした。80万個のプラークを調べたうち23個のポジティブなクローンを得た。
次に核小体への局在を調べるために、pSRαを改変したEukaryote expression vectorに上記クローンを全てsukloneした。CV-1細胞やHeLa細胞にトランスフェクション後、上記抗体を用いた蛍光抗体法によって調べたところ、1つのクローンが核小体を染めることを見い出した。このクローンの塩基配列を決定したところ、70Kda以上の蛋白質をコードしている不完全なcDNAであることがわかった。又RexのN末端とやや似たアミノ酸配列が2ヶ所見い出された。
Rexはcellular cofactorを共同して働いていると考えられている。そこで、Rexと機能的に関連していることを調べるために、Rexに対するTrans Dominant Inhibitionの性質を有するかどうか、23クローン全てについて調べた。その結果2クローンがRexの作用を昂進させた。現在、この現象を種々のレポーターを用して確認することを行っている。
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