| Project/Area Number |
04152128
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Cancer Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Japanese Foundation For Cancer Research |
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Principal Investigator |
野田 亮 癌研究所, ウイルス腫瘍部, 部長 (30146708)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村田 哲 癌研究所, ウイルス腫瘍部, 研究員
高井 節夫 癌研究所, ウイルス腫瘍部, 研究員 (40241236)
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| Project Period (FY) |
1992
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1992)
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| Budget Amount *help |
¥10,000,000 (Direct Cost: ¥10,000,000)
Fiscal Year 1992: ¥10,000,000 (Direct Cost: ¥10,000,000)
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| Keywords | Krev-1 / FISH / 染色体マッピング / tenascin / CDC24 / RSR1 |
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| Research Abstract |
1)ヒトKrev-1遺伝子の大部分を含むDNA断片をクローニングし、そのexon-intron構造を明らかにした。また、Krev-1のpseudo-geneを一つ見いだし、その塩基配列を決定した。さらに、FISH法によりそれらの遺伝子の染色体マッピングを行ない、それぞれ1p13.3、14q24.3に位置するという結果を得た。
2)ヒトKrev-3遺伝子産物(tenascinのC-端側1/4に対応)はパン酵母CDC24蛋白質と弱い類似性を持つ。パン酵母ではCDC24やそのmulticopy suppressorであるRSR1(Krev-1とかなり強い類似性を持つ)は発芽部位の決定に関与しており、それらの遺伝子の変異は、rancom buddingを引き起こすことが知られている。そこで、ヒトKrev-3遺伝子を酵母細胞内で過剰発現させてみたところ、やはりrandom budding現象が観察された。
3)新しくデザインされたλファージ型発現ベクターを用いてヒト線維芽細胞(MRC-5)cDNAライブラリーを作成し、これをc-Ki-rasでトランスフォームしたNIH3T3細胞(DT株)にトランスフェクト後、培養シャーレへの接着性が増した4クローンの変異細胞(フラット・リバータント)を単離した。それらの細胞に組み込まれているトランスフォーメーション抑制遺伝子の候補cDNAを大腸菌に回収したところ、各々7,6,4,3,1.8kbの長さを持つ5種のcDNAが得られた。この内6kbのcDNAは独立に単離された複数のリバータントから回収された。単独のプラスミドをDT細胞にトランスフェクトしたところ、6kb及び1.8kbのcDNAにリバータント誘導活性が認められた。このうち6kbのcDNAについては、部分塩基配列を決定したが、今のところデータベース中に類似配列は見いだされていない。一方、1.8kbのcDNAはホメオボックスを持つ蛋白をコードしていることが分かった。担し、我々の得たcDNAは5'末端が一部欠落していると思われる。
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