アザチロシンにより誘導されたリバータント細胞で、特異的に発現している遺伝子の解析

Research Project

Project/Area Number	04152144
Research Category	Grant-in-Aid for Cancer Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
Principal Investigator	岡田信子国立がんセンター研究所, 生物学部, 主任研究官 (70194363)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	西村暹萬有製薬株式会社, つくば研究所, 所長 (20076970)
Project Period (FY)	1992 – 1994
Project Status	Completed (Fiscal Year 1992)
Budget Amount *help	¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000) Fiscal Year 1992: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords	アザチロシン / リバータント細胞 / がん抑制遺伝子 / rrg / Ca結合蛋白質 / Ca-31 / pEL98 / ras
Research Abstract	アザチロシンによって活性化したras系、raf又はc-erbB-2でトランスフォームした細胞から扁平なリバータント細胞が誘導される。活性化したc-Ha-rasでトランスフォームした細胞からアザチロシンによって誘導されてくるリバータント細胞について詳細に検討したところ、リバータント細胞では元のトランスフォームした細胞と同量のp21が発現しており、しかも培地中からアザチロシンを除いても扁平な形態を保持し、又、軟寒天中でコロニーを形成しない事がわかった。この事は活性化したp21の活性を抑制するようながん抑制遺伝子の発現がアザチロシンによって恒久的に誘導されたことを示唆している。そこでcDNA differential hybridization法によってリバータント細胞で特異的に発現している遺伝子を探索したところ、がん抑制遺伝子であるrrg(ras racisiongene)、rhoB、コラーゲンタイプIIIや本年度詳しい解析を行ったCa-31を同定する事が出来た。Ca-31のcDNAをプローブとしてノーザンブロット分析を行ったところ、0.6kb、4.5kb、6.0kbの3種類のmRNAが同定された。0.6kbのmRNAについてはBalb/c3T3細胞で特異的に発現しているCa結合蛋白質であるpEL98のmRNAである事がわかった。Ca-31は、4.5kb又は60kbのmRNAから由来しており、pEL98と同一の遺伝子からスプライシングの違いによって生じたものである事がわかった。又、Ca-31はpEL98や牛の脳の分化に伴って発現の増加が認められるS-100αやβなどのCa結合蛋白質で保存されているCaと結合するアミノ酸配列を示す領域を含み、更に新たなる領域も含んでいるCa結合蛋白質の仲間である事が明らかになった。現在、pEL98及びCa-31を各々発現ベクターpMAMneoに導入し、リバータント細胞の誘導や保持に対する活性の同定を試みている。