| Project/Area Number |
04454228
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
公衆衛生学
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| Research Institution | Osaka Prefectural Institute of Public Health |
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Principal Investigator |
牧野 正直 大阪府立公衆衛生研究所, 微生物課, 微生物課長 (00116097)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 定彦 大阪府立公衆衛生研究所, 病理課, 研究員 (90206540)
勝川 千尋 大阪府立公衆衛生研究所, 微生物課, 主任研究員 (20183725)
東 逸男 大阪府立公衆衛生研究所, 微生物課, 主任研究員 (00250275)
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| Project Period (FY) |
1992 – 1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥6,500,000 (Direct Cost: ¥6,500,000)
Fiscal Year 1993: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 1992: ¥5,300,000 (Direct Cost: ¥5,300,000)
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| Keywords | リボゾームRNA遺伝子 / 16S-23S非コード領域 / PCR / 結核の疫学的研究 / PCR産物直接塩基配列決定 / 抗酸菌 / 臨床分離結核菌 / 16S・23S非コード領域 |
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| Research Abstract |
学校や塾における集団発生や海外からの移入等は、今日結核感染において注目されている問題の一つである。しかし、原因菌に対する疫学的調査の方法はこれまでに確たるものは存在していない。そこで我々は結核菌の疫学的同定法の確立を目指して研究を進めている。16SリボゾームRNA(rRNA)遺伝子と23S rRNA遺伝子の間の非コード領域の構造の多様化に着目し、この部分の塩基配列を決定、比較することにより結核菌の疫学的同定が可能かどうかについて検討を行なった。
1)プライマーの選択
プライマーは16S rRNA遺伝子の3′末端付近と23S rRNA遺伝子5′末端付近で、様々な菌種の間で保存性に基づいて選択した。結核菌H37Rv株より抽出したDNAを鋳型としてプライマーのペアおよび反応条件の検討を行なった。
2)塩基配列の決定および比較
結核菌標準株4株、結核菌以外の抗酸菌20株及び臨床分離結核菌40株よりPCRにより16S-23S非コード領域を増幅し、大腸菌ベクターpUC18にサブクローニングした。得られたプラスミドDNAを鋳型としてA.L.F.DNAシーケンサにより塩基配列を決定後、それぞれの比較を行なった。その結果、結核菌とその他の抗酸菌の間にはこの領域の塩基配列に明らかな違いが見られ、結核菌の他の抗酸菌よりの鑑別には適していることが判明した。結核菌標準株どうしには1から4個の塩基置換が見られた。しかし臨床分離結核菌どうしは塩基置換が見られなかった。これは、16S-23S非コード領域がPCR産物直接塩基配列決定による結核の疫学的研究に利用できない領域であることを示すものである。
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