ほ乳類ダイニンβ重鎖の遺伝子クローニング

Research Project

Project/Area Number	04640680
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	動物発生・生理学
Research Institution	Okazaki National Research Institutes
Principal Investigator	小川和男岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 助手 (30132731)
Project Period (FY)	1992
Project Status	Completed (Fiscal Year 1992)
Budget Amount *help	¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000) Fiscal Year 1992: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Keywords	ダイニン / モーター蛋白質 / PCR / ATP結合配列
Research Abstract	ダイニンファミリーのなかでアクソネームダイニンの全一次構造が91年に、細胞質ダイニンが92年に解明された。いずれも分子中央に4つのATP結合部位があった。特に最初のATP結合部位周辺のアミノ酸配列には高い相同性があり、モーターファミリー間でも種を通じても保存されていた。そこで哺乳類のアクソネームタイプのダイニンβ重鎖cDNAを分離する目的でウニダイニンβ重鎖のTDRCY(1068-1072)配列に相当するオリゴヌクレオチドとFITMNPGY(1188-1195)配列に相当するアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。この2つのプライマーとマウスの精巣のcDNAを用いてDNA増幅反応(PCR)を行なった。できたDNAをT-ベクターにつなげヌクレオチド配列を決定した(図参照)。増幅されたDNAにはウニ精子ダイニンβ重鎖のATP結合配列があったのでマウスのアクソネームダイニンのβ重鎖が増幅されたと判断した。したがってこのプライマーを使えば鋳型DNAに依存してダイニンのβ重鎖cDNAやジェノミックDNAをPCR法によって増幅させることが可能となった。 Query: 1 TDRCYRTLFGALHLHLGGAPEGPAGTGKTETTKDLAKAVAKQCVVFNCSDGLDYLALGKF 60 TDRCY TL +LHL ++GAP GPAGTGKTETTKDL++A++ VFNCS+ +DY + G+ Sbjct: 1068 TDRCYITLTQSLHLVMSGAPAGPAGTGKTETTKDLGRALGIMVYVFNCSEQMDYKSCGNI 1127 Query: 61 FKGLISCGAWACFDEFNRIDLEVLSVVAQQILTIQRGINAGTELLVFEGTELKLDPTCAV 120 +KGL GAW+CFDEFNRI +EVLSVVA Q+ +Q +I E F G E+ L P+ ++ Sbjct: 1128 YKGLAQTGAWGCFDEFNRISVEVLSVVAVQVKCVQDAIRDKKERFNFMGEEISLIPSVGI 1187 Query: 121 FITMNPGY 128 FITMNPGY Sbjct: 1188 FITMNPGY 1195