| Project/Area Number |
04670416
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Gastroenterology
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
飯野 四郎 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 教授 (30010309)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小池 和彦 東京大学, 医学部, 助手 (90234658)
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| Project Period (FY) |
1992
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1992)
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| Budget Amount *help |
¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1992: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | C型肝炎ウイルス / トランスジェニックマウス |
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| Research Abstract |
C型肝炎ウイルス(HCV)による発癌機構のモデルとして、HCV遺伝子導入トランスジェニックマウスを作製するため、まずHCVの構造遺伝子領域のうちコア蛋白とエンベロープ蛋白部分を発現するための導入遺伝子を準備した。国立予研宮村博士より供与されたHCVクローンpSR39x、pSR824xからそれぞれ切り出したPstI-EcoRI断片をT4DNAポリメラーゼを用いてblunt end化した後、BglIIリンカーを用いて既報の肝特異発現ベクターpBEPxのBglII酵素部位に挿入した。このようにして作製されたプラスミドpBEP39,pBEP824を用いて、まず培養細胞での発現を検討した。一過性発現のシステムでコア、エンベロープ蛋白ともに発現していることが、単クローン抗体を用いたウェスタンブロットで明らかになった。次いでこれらのプラスミドからベクター部分を取り除いて精製したDNA断片をマウス授精卵に導入した。導入マウスとしていは今回はCD-1マウスを用いた。出生してきたマウスの尾からDNAを抽出し、PCRを用いてスクリーニングし、陽性サンプルについてサザンブロットで確認し導入コピー数などを検討した。現在これらの初代マウスをCD-1の掛け合わせてF1マウスを作製しているところである。
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