| Project/Area Number |
04670742
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
General surgery
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
渡辺 大介 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (60191772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 秀彰 九州大学, 生医研, 助手
井上 裕 九州大学, 生医研, 助手 (90203249)
上尾 裕昭 九州大学, 生医研, 助教授 (70150430)
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| Project Period (FY) |
1992 – 1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1992)
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| Budget Amount *help |
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1992: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
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| Keywords | サイトカイン / 遺伝子治療 / TNF / VX_2細胞 / 肝動脈注入療法 |
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| Research Abstract |
本年度は基礎的検討として、以下の実験結果を得た。
1.遺伝子組み換え体の作製 IL2cDNA及ずTNFcDNAを、cytomegarovirus promotorを持つ、真核細胞発現ベクターpRc/CMVに組み換え遺伝子組み換え体を作製した。
2.遺伝子移入における手技の確立 Interleukin2[IL2]cDNAをpRc/CMV plasmid vectorに組み換え、ヒト胃癌株化細胞MKN-28にChen-Okayama法を用いて、transfectionした。その結果、21クローンを得、約30〜60日の間、培養上清中にIL2蛋白を分泌することを確認した。その際、確かに移入細胞にIL2cDNAがtransfectされていることをPCR法にて確認した。
3.VX2腫瘍由来のcell lineの樹立 ウサギの肝臓で継代移植されているVX2腫瘍をin vitroの培養系に移して細胞株を樹立し、gene transfectionを試みるとともに、VX2細胞におけるTNF,IL2,IFNのcytotoxicityをコロニー形成率やMTTassayをもちいて検討した。
初年度に達成されたこと
1. IL2及びTNF-cDNAのpRc/CMV plasmid vectorへの組み替え体の作成
2. IL2/pRc/CMVを胃癌細胞株MKN-28にChen-Okayama法にてtransfectionすることでtransfection efficiency,gene expression efficiency,gene expression stability,protain analysisを解析することができた。
3.家兎継代VX2腫瘍のcell line化とその各種サイトカインに対する感受性の測定
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