| Project/Area Number |
05152010
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Cancer Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
益子 高 東北大学, 薬学部, 助教授 (30157200)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 真也 , 教務職員 (40196829)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 1993: ¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
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| Keywords | 細胞増殖関連抗原 / 遺伝子クローニング / モノクローナル抗体 |
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| Research Abstract |
1.細胞増殖関連抗原gp125-HC蛋白のマイクロシーケンス:ラット肝癌細胞より抗gp125モノクローナル抗体のアフィニテイーカラムにて精製した蛋白をマイクロシーケンスした結果、ヒト及びマウスの4F2抗原のラット相同蛋白であることが示唆された。
2.細胞増殖関連抗原gp125-HCの遺伝子クローニング:マイクロシーケンスにて決定されたアミノ酸配列に基ずいてDNAプライマーを合成、PCRにてラットgp125の全塩基配列を解読した結果、4F2抗原同様、C末端を細胞表面に露出した二型糖蛋白であることが判明した。
3.gp125ペプチドに対する抗体作成:クローン化したgp125遺伝子のアミノ酸配列に基ずき、細胞外の親水性領域ペプチド配列を認識するモノクローナル抗体を作成、Western blotにてgp125-HCの分子量85kDaを検出し得た。
4.gp125トランスフェクタント:クローン化した遺伝子導入トランスフェクタントを作成、抗gp125-HC抗体と反応することを確認した。また、抗gp125-HC抗体でトランスフェクタントを処理した際の、細胞内アミノ酸取込み阻害を見いだした。
5.アンチセンスDNA:gp125-HC遺伝子の様々の領域に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドが癌細胞のDNA合成を阻害することを確認した。
6.抗体の化学修飾:抗gp125-HCモノクローナル抗体を化学修飾することで、免疫沈降法及びパラフィン切片の免疫組織染色における抗体の結合力が増強された。
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