| Project/Area Number |
05253217
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Institution | 山梨医科大学 |
|---|
Principal Investigator |
前田 秀一郎 山梨医科大学, 医学部, 教授 (10117244)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1992 – 1993
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
|
| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1993: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
|
|---|
| Keywords | アミロイドーシス / 血清アミロイドP成分 / ジーンターゲティング / 相同DNA間組換え / 胚幹細胞 / 遺伝性疾患 |
|---|
| Research Abstract |
1.マウス胚幹(ES)細胞の血清アミロイドP成分(sap)遺伝子に挿入変異を導入するため、ES細胞の由来した129/Sv//Evマウスの遺伝子ライブラリーからsap遺伝子を単離し、これを用いて、次のようなジーンターゲティングベクターを構築した。
[5'-flanking region(約1.8kb)及び3'-flanking region(約2.5kb)を含む全sap遺伝子の第2エクソンに、マウスのES細胞で発現するMC1プロモーターに接続したG418耐性遺伝子を挿入し、さらにMC1プロモーターに接続したヘルペスtk遺伝子を5'端に接続したもの。]
2.上記1.のベクターをマウスES細胞に導入して得たG418及びFIAUに耐性の約120個の細胞の各々からDNAを抽出した。
3.上記2.のDNAの各々について、PCR法で、ジーンターゲティングの有無を調べた。しかし、変異遺伝子に特異的な2.9kbのフラグメントの増幅は無く、3個に1.6kbのフラグメントの増幅を認めた。そこで、これら3個のクローンについて、DNAをEcoR1制限酵素で切断し、sap遺伝子の5'端をプローブとして、サザーンブロット法で遺伝子標的組み込みの有無を検索した。しかし、内在性の正常sap遺伝子由来の5.8kbのバンドのみを認めた。これら3個のクローンについては、sap遺伝子の3'端をプローブとして、同様にサザーンブロット法で遺伝子標的組み込みの有無を検索する計画である。また、今後さらに多くのG418及びFIAUに耐性のES細胞を調べ、sap遺伝子に挿入変異が導入された細胞株を単離したいと考えている。
|
