胸腺細胞のアポトーシスにおけるFas抗原の関与

• Project/Area Number: 05272222
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Osaka Bioscience Institute
• Principal Investigator: 長田 重一 財団法人 大阪バイオサイエンス研究所, 第一研究部, 研究部長 (70114428)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須田 貴司 〃, 第一研究部, 研究員 (70250090)
• Project Period (FY): 1993
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1993)
• Budget Amount: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000); Fiscal Year 1993: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
• Keywords: アポトーシス / 細胞死 / サイトカイン / 受容体 / 自己免疫疾患 / 遺伝子疾患 / Fas / Fasリガンド

Research Abstract

T-リンパ球はその成熟,分化の種々の過程で死滅する。即ち,自己の抗原に反応するT-細胞や機能し得ないT-細胞受容体を発現する細胞など90%以上の前駆細胞は胸腺で死滅し,また成熟細胞も自己抗原と反応する細胞や一旦活性化された細胞は末梢において死滅する。Fasは,TNF/NGF受容体群に属するタイプI膜タンパク質であり,アポトーシスのシグナルを伝達する。私達はこれまでに,マウスのlpr(lymphoproliferation)はFas遺伝子の変異であることを示した。lprマウスは,異常T-細胞が蓄積し自己免疫疾患の症状を示すことから,FasはT細胞の成熟過程,特にその死の過程に関与していると考えられた。本研究ではマウスFas染色体遺伝子を単離し,Fas遺伝子は70kb以上から成り9コのエクソンにより構成されていることを示した。そしてlprマウスのFas遺伝子の構造の解析から,このマウスでは内存性レトロウイルスの一種,ETn(early transposable element)がイントロン2に挿入されていることが示された。ETnの両端にはpoly(A)シグナルを持つLTR(long terminal repeat)が存在し,これによりFasの転写はイントロン2で終結し,正常なFas mRNAは殆ど発現されていなかった。一方,マウスFasを大量に構成的に発現する細胞株を抗原としてハムスターを免疫し,その脾臓細胞より,マウスFasに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ株を樹立した。そして,この抗体を用いてマウス胸腺細胞を染色したところ,CD4^-CD8^-胸腺細胞を除き,CD4^+CD8^+,CD4^+CD8^-,CD4^-CD8^+細胞でFasの発現が認められた。一方、lprマウスではどの胸腺細胞でもFasの発現は認められなかった。しかし,その胸腺細胞の成熟過程は一見正常であった。lprマウスは自己免疫疾患を呈することから,FasがT-リンパ球やB-リンパ球の成熟段階に関与していることは確実であるが,どの過程に関与しているかは今後の課題である。

Research Products

• [Publications] Adachi et al.: "Aberrant transcription caused by an insertion of an early transposable element in intron of the Fas antigen gene of lpr mice" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 1756-1760 (1993)
• [Publications] Ogasawara et al.: "Lethal effect of the anti‐Fas antibody in mice" Nature. 364. 806-809 (1993)
• [Publications] Fukunag et al.: "Growth and differentiation signals mediated by two different regions in the cytoplasmic domain of G‐CSF receptor" Cell. 74. 1079-1087 (1993)
• [Publications] Suda et al.: "Molecular cloning and expression of the Fas ligand,a novel member of the tumor necrosis factor family" Cell. 75. 1169-1178 (1993)
• [Publications] Suda and Nagata: "Purification and characterization of the Fas-ligand that induces apoptosis" J.Eep.Med. (in press). (1994)
• [Publications] Takahashi et al.: "Generalized lymphoproliferative disease (gld) in mice caused by a point mutation in the Fas ligand" Cell. (in press). (1994)