N-(9-アクリジニル)マレイミド蛍光検出による新しい超高感度酵素分析法の開発
| Project/Area Number |
05660124
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Bioproduction chemistry/Bioorganic chemistry
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| Research Institution | Jumonji Junior College |
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Principal Investigator |
鎌田 恒夫 十文字学園女子短期大学, 家政科, 助教授 (20122963)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
目黒 煕 (目黒 〓) 東北大学, 農学部, 教授 (30005590)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 1993: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
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| Keywords | N-(9-Acridinyl)-maleimide / Fluorometry / Enzymatic assay / Hydroperonide / Glutathione peronidase / Glutathione reductase / Cholinesterase / N-(9-Acridinyl)maleimide / Enzymotic assay / Hydnoperopide / Glutathione redilotase / Cholimesterase |
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| Research Abstract |
申請者によって開発されたN-(9-アクリジニル)マレイミド(NAM)はスルフヒドリル(SH)基に特異的に反応して強い蛍光を発するSH検出試薬である。本研究は、グルタチオン(GSH/GSSG)などSH基の関与する酵素反応と、NAMによる蛍光分析とを組合せ、生体成分や酵素活性を高感度で測定することである。申請年度において、グルタチオンレダクターゼ活性とコリンエステラーゼ活性の高感度測定法を開発し、それぞれ研究発表した。
(1)[グルタチオンレダクターゼ酵素活性の超微量測定法]
NADPHの存在下、GSSGをGSHに還元する反応を解媒するグルタチオンレダクターゼ活性のNAM蛍光による高感度測定法を開発した。動物肝臓やヒト血しょうなどの生体成分に応用し、従来のNADPH紫外部吸収法を比較した。本法は、操作法の簡便性の点では、従来法と同等であるが、精度は2〜8倍、感度は、10〜50倍高く、多数の試料を高感度でスクリーニングする手段として実用性があることを報告した。
(2)[コリンエステラーゼ活性の超微量測定法]
肝機能の指標として測定されるコリンエステラーゼ活性のNAM蛍光による高感度測定法を開発した。動物肝臓やヒト血しょうなどの生体成分に応用し、従来のDTNB法と比較した。操作法は、従来法と同じく簡便であり、精度もほぼ同程度であるが、感度は50〜100倍高く、実用的な方法であることを報告した。
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Report
(2 results)
Research Products
(4 results)
