蛋白質の分泌生産に対する折りたたみ酵素の役割

• Project/Area Number: 05660387
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Applied molecular and cellular biology
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 鵜高 重三 名古屋大学, 農学部, 教授 (70023463)
• Project Period (FY): 1993
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1993)
• Budget Amount: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000); Fiscal Year 1993: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
• Keywords: 蛋白質の折りたたみ酵素 / 蛋白質の分泌生産 / ジスルフィド結合生成酵素

Research Abstract

Bacillus brevisを宿主に用いる蛋白質分泌生産系によって、種々の有用蛋白質を生物活性を有する形で効率よく生産することができる。分泌生産されたポリペプチドが正しい立体構造を持つ蛋白質を形成するために作用している2種類の折りたたみに関する酵素の性質を明らかにしようとした。大腸菌のジスルフィド結合生成酵素(DSB)の遺伝子の欠失を相補するようなB.brevisの染色体DNA断片をクローン化し、B.brevisのDSB遺伝子を同定して塩基配列を決定した。そのアミノ酸配列中にプロテインジスルフィドイソメラーゼやチオレドキシンなどの活性中心と考えられている配列と類似した配列が存在していた。本遺伝子を多コピープラスミドにのせB.brevisによる大量発現を行い、培養上清からDSBを分離・精製した。この酵素はインスリンの還元反応や還元RNaseより活性化反応を触媒した。精製したDSBを抗原として作製した抗体を用い、アルカリ性フォスファターゼや上皮増殖因子の分泌後のジスルフィド結合の生成反応を検討中である。ポリペプチドの折れ曲がりに関するペプチジルプロリルシストランスイソメラーゼの遺伝子をB.brevisの染色体よりクローン化し、その遺伝子構造を検討中である。