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培養副腎髄質細胞における転写調節因子の変動とNaチャンネル発現の制御

Research Project

Project/Area Number 05670099
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General pharmacology
Research Institution宮崎医科大学

Principal Investigator

和田 明彦  宮崎医科大学, 医学部, 教授 (30131949)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 山本 隆一  宮崎医科大学, 医学部, 助手 (10094111)
占部 正信  宮崎医科大学, 医学部, 助手 (00094087)
Project Period (FY) 1993
Project Status Completed (Fiscal Year 1993)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1993: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
KeywordsNa channels / Expression / A Kinase / C Kinase / ^3H-saxitoxin / ^<22>Na influx / Veratridine / Brevetoxin
Research Abstract

Naチャネルのdensityは、ニューロンの各部位において、それぞれけ個有の範囲に保たれており、そのことが細胞興奮性を精緻に調節し、ひいては、細胞機能(神経伝達物質の合成、分泌など)を大きく修飾している。
遺伝子転写に関与するtrans-elementsが、リン酸化を受けることにより活性化されることが知られている。そこで、今回、私達は、培養ウシ副腎髄質細胞Naチャネルの発現を変動させる細胞内メッセンジャー、蛋白質リン酸化酵素を検討した。
1.Aカイネースの関与
a)細胞内環状AMP濃度を上昇させる因子(環状AMP、フォスフォジエステラーゼ阻害剤、フォルスコリン)の慢性(10数時間)投与は、Naチャネルへの^3H-サキシトキシン結合のBmaxを増加させた(Kdは不変)。これらの作用は、Aカイネース阻害剤投与により阻止された。
b)投与阻害薬アクチノマイシンD、翻訳阻害薬サイクロヘキサマイド、蛋白グリコシレーション阻害薬テュニカマイシンの存在下では上記の^3H-サキシトキシン結合量増加は認められなかった。
c)ヴェラトリジン、ブレベトキシンによる細胞内への^<22>Na流入のアロステリック調節機構は、処理細胞においても保持されていた。ヴェラトリジン、ブレベトキシンのEC_<50>は不変であったが、^<22>Na流入量は増大した。
Cカイネースの関与
a)プロテイン・カイネースC(PKC)賦活薬処理細胞では、10数時間の潜時ののち、^3H-サキシトキシン結合のBmaxが減少した(Kd不変)。PKC活性化作用をもたないアナログは、効果がなかった。これらの作用は、Cカイネース阻害薬により阻止された。
b)PKC賦活薬の作用は、PKCのdown-regulation(^3H-PDBu結合で測定)ののちに進行した。^3H-PDBu結合、および、^3H-サキシトキシン結合のdown-regulationは可逆的であった。
c)Naチャネル崩壊率は、PKC賦活薬処理群と対照細胞との間では差を認めなかった。
ヴェラトリジン、ブレベトキシンのEC_<50>は不変であったが、^<22>Na流入量は減少した。
以上、Aカイネース、Cカイネースによりリン酸化された転写調節蛋白が、Naチャネル遺伝子の発現を促進、抑制していることが示唆された。

Report

(1 results)
  • 1993 Annual Research Report
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    (6 results)

All Other

All Publications (6 results)

  • [Publications] A.Wada,Y.Uezono,F.Izumi: "Down-regulation of voltage-dependent sodium channel and protein kinase C in cultured bovine adrenal medullary cells." Japanese Journal of Pharmacology. 61(Sup.I). 254 (1993)

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  • [Publications] T.Yuhi,A.Wade et al.: "Characterization of〔^3H〕brevetoxin binding to voltage-dependent sodium channels in adrenal medullary cells." Naunyn-Schmiedeberg′s Archives of Pharmacology. in press. (1994)

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      1993 Annual Research Report
  • [Publications] T.Yuhi,T.Yanagita et al.: "cAMP mediater expression of voltage-dependent Na channel in cultured bovine adrenal medullary cells." Japanese Journal of Pharmacology. 64. (1994)

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      1993 Annual Research Report
  • [Publications] T.Yanagita R.Yamamoto,et al.: "Protein Kinase C and down-regulation of voltage-dependent Na channel in bovine adrenal medulla cells." Japanese Journal of Pharmacology. 64. (1994)

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      1993 Annual Research Report
  • [Publications] A.Wada,Y.Uezono,R.Yamamoto,et al.: "Negative modulation of voltage-dependent sodium channel by the channel activator in cultured bovine adrenal medullary cells." Japanese Journal of Pharmacology. 64. (1994)

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  • [Publications] H.Niina,A.Wada et al.: "Brevetoxin PbTx-3 binds to a new neurotoxin receptor and causes allosteric activation of voltage-dependent sodium channel in cultured bovine adrenal medu llary cells" Japanese Journal of Pharmacology. 64. (1994)

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      1993 Annual Research Report

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Published: 1993-04-01   Modified: 2016-04-21  

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