| Project/Area Number |
05670813
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Psychiatric science
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| Research Institution | Ehime University |
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Principal Investigator |
溝渕 睦彦 愛媛大学, 医学部・附属病院, 講師 (00166042)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柿本 泰男 愛媛大学, 医学部, 教授 (60028305)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1993: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | 蛋白カルボキシメチル基転移酵素 / cDNA / 赤芽球 |
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| Research Abstract |
既報のcDNA配列をもとに、ラット脳のcDNAからPCRで124bp DNA断片を増幅し、124bp断片が単一に得られた。このDNAをプローブに用いて、8種類のヒト血球由来の培養細胞をノーザンブロットした結果が図1である。すべての血球由来培養細胞から1.1と1.6kbの2種類のmRNAが検出された。ヒト赤芽球細胞から増幅した146bp断片が、報告されている配列と同一であることを確認した後、プライマーを合成し未知の部分を増幅解析した。3'末端のDNAは、ヒト赤芽球細胞のpolyA^+RNAから(dT)_<17>プライマーで逆転写し、nestedプライマーと既知の部分のプライマーで二度PCR増幅して得た。5'末端は、既知の部分のプライマーで逆転写し、terminal deoxynucleotidyl transferaseを用いて末端にpolyAを付加した。その後の増幅は、3'末端で用いた方法と同じである。1.6kbに相当するcDNAは、1600と1553bpの2種類から構成され、それぞれのcDNAの全塩基配列を決定した。
〔要約〕
ラット脳Isoaspartyl Protein Carboxyl Methyltransferase(PIMT)cDNA配列をもとに、PCRを用いDNAプローブを作成した。8種類のヒト血球由来の培養細胞からRNAを抽出し、ノーザンブロットを行なった。長さの異なる2種類のRNA(1.1、1.6kb)が検出された。mRNAを抽出し1.6kbに相当するcDNAをNested RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法で配列決定した。スプライシングの違いにより、1600と1553bpの2種類のcDNAが同定された。この2種類のcDNAから推定される蛋白は、C末端の一部が異なることが明らかになった。
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