骨格筋弾性タンパク質コネクチンのクローニングと巨大タンパク質発現系の検討
| Project/Area Number |
05740513
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
動物生理・代謝
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
丸山 敬 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 遺伝情報研究部門, 研究員 (30211577)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1993: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
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| Keywords | コネクチン / チチン / 骨格筋 / クローニング / 弾性タンパク質 / 巨大タンパク質 / 筋原線維 |
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| Research Abstract |
骨格筋の収縮はアクチンとミオシンの相互作用によるが、弛緩時には、構造蛋白質の一種である弾性蛋白質が重要である。これらの蛋白質の弾性により筋肉は、円滑に収縮と弛緩を行なうことができる。この蛋白質の代表が、筋肉の縦方向に走行する分子量300万を越える巨大なコネクチンである。このような巨大蛋白質のアミノ酸配列、遺伝子構造、生合成の過程は、通常の分子量20万以下の蛋白質とは異なる可能性があり、そのクローニングを試みた。
特異的抗体によりニワトリのコネクチンのcDNAのクローニングを試みた。その結果、3kbのpCN1と4kbのpCN3が得られた。どちらのクローンも、そのmRNAは非常に巨大であることがノーザンブロッティングで確認できた。pCN3は全長にわたるアミノ酸フレームが存在し、約1300個のアミノ酸をコードしていると考えられた。細菌でその一部を発現させ、ウサギで特異的抗体を作成した。その抗体は、ウエスタンブロッティングにてコネクチンを認識し、筋原線維のI帯の中間のN2ライン付近を染色した。また、pCN1は、配列から3末端側のクローンと考えられ、約800個のアミノ酸配列が推定された。合成ペプチドに対する抗体は、やはりブロッティングにてコネクチンを認識し、筋原線維のM線を染色した。以上結果から、このこれらのクローンはコネクチンのクローンであることが明かになった。
現在報告されているウサギ・コネクチン、ヒト心筋コネクチンなどの部分配列と比較すると、類似性は高いものの、相違点も見いだされた。今後はこの違いの意味について検討していきたい。さらに、巨大タンパク質のC末端とN末側のそれぞれにに特異的な抗体が得られたので、巨大ペプチドの合成速度の測定を次の課題としたい。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)
