| Project/Area Number |
05770110
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Pathological medical chemistry
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience |
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Principal Investigator |
小島 崇 (財)東京都神経科学総合研究所, 神経生化学研究部門, 主事研究員 (30225429)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1993: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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| Keywords | 筋ジストロフィーマウス / 筋原線維 / C-蛋白質 / 蛋白分解酵素 / キモトリプシン |
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| Research Abstract |
[目的]筋ジストロフィーにおける筋蛋白質の異常を2次元電気泳動法で解析中に、筋原線維のAフィラメントの構成成分であるC-蛋白質を特異的に分解する蛋白質分解酵素を発見した。この酵素は骨格筋に特異的に存在し、筋ジストロフィーマウス(mdx)において強い活性を示すことから、筋ジストロフィーにおける筋原線維の崩壊に関与していると考えられる。よって、この酵素の性質を明らかにするために、酵素の可溶化と精製を行った。
[方法]MDXマウスの後肢と背部の筋肉を0.6M NaCl-10mM Tris-HCl,pH7.8溶液に懸濁し、その不溶性画分(A)を2M NaCl-10mM Tris-HCl,pH10.3溶液で抽出した後、リマビーン・トリプシンインヒビターをリガンドとしたアフィニティクロマトグラフィーとゲル漉過によって精製したものを酵素標品として使用した。酵素活性の基質として、精製過程ではFITC-カゼインを、酵素の性質の検討に際してはMCAを抱合した合成ペプチドを使用した。
[結果]精製された酵素標品は分子量約28kDaの蛋白質で、95%以上の純度であった。酵素反応の至適pHは9であった。合成基質に対する活性の強さからchymotrypsin型の酵素であることが分った。精製した酵素の活性は塩濃度によって影響を受けたことから、生体内での塩濃度による酵素活性の制御が示唆された。この酵素のN末25残基までの一次構造はマウスのMMCP-4やラットのRMCP-1と一致した。
[結論]筋ジストロフィーマウス(MDX)の骨格筋に存在する筋原線維構成成分であるC-蛋白質を分解するセリンプロテアーゼの精製に成功した。この蛋白質分解酵素は分子量約28kDaのchymotrypsin型の活性をもつセリンプロテアーゼで、かつ、chymase類の一種であると考えられる。
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