| Project/Area Number |
05770194
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Bacteriology (including Mycology)
|
|---|
| Research Institution | Jichi Medical University |
|---|
Principal Investigator |
切替 照雄 自治医科大学, 医学部 (50192563)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1993
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
|
| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1993: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
|
|---|
| Keywords | 内毒素 / LPS / 血清 / CD14 / マクロファージ / TNF / NO |
|---|
| Research Abstract |
細菌内毒素(LPS)が、どのようにマクロファージに認識され、マクロファージを活性化するのかを明らかにする目的で本研究を実施した。我々は最近マウスマクロファージ細胞株J774.1細胞由来で、1251-LPSの特異的結合が署名に低下した変異株J7.DEF3細胞を分離したので、まずこれらの細胞の生物学的解析をした。この変異株は、モノクロナール抗体を用いたFACS解析からCD14の発現が欠損していること、しかしCD14cDNAプローブをもちいたノーザンブロット解析からCD14mRNAの発現は正常であることが分かった。この変異株は血清の有無に関わらずLPSに反応してTNFやNOを産生した。血清の存在下では、親株に比べ反応性が低下していた。血清の非存在下では親株も反応性は低下したが、この変異株は血清存在下と同様に反応し、その反応性は親株と同じであった。また、LPS以外の刺激物に対する反応性は、親株と変異株で全く差異はなかった。これらの解析からマクロファージのLPSに対する反応性には2種類あり、1つは血清およびCD14抗原依存性の反応であることがわかった。そこでこの血清およびCD14抗原依存性のLPS反応性の機能を解析するため、糖鎖の長さの異なるLPSを用いて、その反応性を検討した。その結果、S型LPSで刺激した場合、変異株のLPS反応性は約300倍低下していたが、Re型LPSやリピドAで刺激した場合この反応性の低下は高々5倍程度であった。これらの結果は、血清およびCD14抗原依存性の経路がS型LPSの活性中心を効率的にLPS受容体に提示する働きがあることを示唆している。この血清因子は易熱性で30-60%の硫安で塩析されるタンパク質で陰イオン交換カラム、陽イオン交換カラム、ゲル漉過などにより、700倍まで精製した。
|
