| Project/Area Number |
05771040
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Cerebral neurosurgery
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
戸田 正博 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1993: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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| Keywords | ドレブリン / 神経再生 / 遺伝子導入 / アクチン結合蛋白質 |
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| Research Abstract |
我々はすでにヒト胎児脳cDNA-lambdagt11ライブラリー(Clontec Labs,CA)より、human drebrin EcDNAを単離し、全塩基配列を決定した。そこで今回、得られたhuman drebrin EcDNAをbetaアクチンプロモーターを有するpMIW-HEPのEcoR V siteおよびmetallotionein-Iプロモーターを有するpMITID13SのHind III siteに挿入した。この発現ベクターをneomycineresistant geneであるpSTB-neoと共に、燐酸カルシウム共沈法に従い、Lcellにco-transfectした。G418によりselectionを行い、ドレブリンE遺伝子導入細胞をcloningしてtransformantを得た。そこで今後、非神経細胞であるLcellに対する、ドレブリンEのもつ神経突起形成作用、アクチンやチュブリン等の細胞骨格蛋白質との相互作用を、ドレブリンAの機能との比較を中心に検討する予定である。抗ドレブリン抗体(M2F6),NBD-phallacidin抗体、抗チュブリン抗体を用いた免疫染色、Western blot解析により、細胞の形態変化およびそれぞれの蛋白発現量の変化を解析する。
一方、antisense human drebrinE発現ベクター(pMTID13S/Hind III site)を作製し、pSTB-neoと共にSH-SY5Y cellにco-transfectし、antisense drebrin E transfectantを得た.さらに上記と同様に、その細胞形態変化および蛋白発現量の変化を解析する予定である.
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