| Project/Area Number |
05771318
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Otorhinolaryngology
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
川嵜 良明 大阪大学, 医学部, 助手 (00224767)
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| Project Period (FY) |
1993
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1993: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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| Keywords | PCR法 / Hunt症候群 / VZV |
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| Research Abstract |
まず、VZVについてPCR法の至適反応条件の設定、特異性、感受性の検討を行った。ついで、Hunt症候群患者から得られた水泡や痂皮などから、PCR法によりVZV-DNAの検出を試みた。また同時に血清学的にVZVのウイルス抗体価の変動も検討した。
PCR法にはその特異性を考慮して、VZV-DNAのgpI領域に対応するプライマーを用いた。反応条件はアニーリング60ﾟC、2分間、伸長72ﾟC、5分間、変性90ﾟC、1分間で30回の増幅とした。これにより得られたDNAを電気泳動し、gpI領域に一致する677bpのPCR産物が得られたことを確認した。さらにサザンブロットハイブリダイゼーションにより、これらのPCR産物がVZV-DNAより得られたものであることを確認した。また、CMV、HHV-6、HSV-1、HSV-2について同様の反応を行い、この反応がVZVに対して特異的であることを確認した。
次に、この方法をもちいてHunt症候群患者の水泡3例、痂皮9例、および口蓋の潰瘍の拭い液1例を材料として検討を行った。これらのすべての検体でVZV-DNA陽性であった。また、アシクロビルの前投与は全身投与、局所投与にかかわらず、PCR反応の結果に影響を与えなかった。一方、抗体価の変動の検討をおこなった10例中9例は血清学的にもVZVの再活性化が証明されたが、1例については血清抗体価の変動を確認できなかった。このように、PCR法によるVZV-DNA検出がHunt症候群において非常に感度が高く、診断法として確実であることが証明された。
今後、さらに他の検体や、他のウイルスについてもPCR法を用いて同様の検討を行っていく予定である。
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