真核細胞DNAプライマーゼ複合体の構造と機能に関する分子遺伝学的研究

• Project/Area Number: 05772008
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Biological pharmacy
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 浴 俊彦 理化学研究所, ジーンバンク, 研究員 (40192512)
• Project Period (FY): 1993
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1993)
• Budget Amount: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 1993: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: DNAプライマーゼ / cDNA / 複製関連酵素 / 染色体マッピング

Research Abstract

DNAプライマーゼは、原核細胞から真核細胞にいたるまでDNA複合開始に必須な酵素である。本研究においては、ヒトDNAプライマーゼを構成する46kDa、54kDaサブユニットをコードするcDNAクローンの一次構造の解析、ゲノミック遺伝子の解析を通じて、DNAプライマーゼに関する分子生物学的知見を得ることを目的とした。その結果、以下のことが明らかにされた。
1 ヒトDNAプライマーゼを構成する46kDa、54kDaサブユニットをコードするcDNAクローンをlambdagt10ライブラリーより単離し、全一次構造を決定した。46kDaサブユニットについては420アミノ酸残基の、また54kDaサブユニットについては505アミノ酸残基から成るopen reading frameを得た。
2 一次構造について酵母、マウス、ヒトで比較した結果、両サブユニットについて5カ所づつの保存されたドメイン(金属結合モチーフ等を含む)が見いだされた。また糖鎖付加部位については46kDa、54kDaサブユニットにつき2カ所、1カ所の存在が示唆された。
3 ノーザン法により46kDaサブユニットについては2.7kbと1.4kbの、また54kDaサブユニットについては2.4kbの長さの転写産物が検出された。
4 ESTプライマーと雑種細胞DNAパネルとを用いたPCR解析、また各々の遺伝子を含むコスミドクローンを用いた蛍光in situ hybridization法によって遺伝子の染色体マッピングを行った結果、46kDaサブユニット遺伝子については1番染色体テロメアに、54kDaサブユニット遺伝子については、3番と6番(短腕セントロメア近傍)染色体に座乗していることが明らかにされた。
5 発現ベクターを利用した両蛋白質の大量調製、また各遺伝子につき5'上流領域を含むエキソン・イントロン構造の解析を現在行っている。