| Project/Area Number |
06248226
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
三浦 恵 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (60157427)
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| Project Period (FY) |
1994
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1994)
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| Budget Amount *help |
¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 1994: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
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| Keywords | アシルCoAオキシダーゼ / ペルオキシソーム / ウリカーゼ / 蛋白質の局在化 |
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| Research Abstract |
本研究はラット肝臓のペルオキシソーム蛋白質の局在化機構を分子レベルで解明する。目的遂行の第一歩として申請者はアシル-CoAオキシダーゼ(AOX)並びにウリカーゼを高度に純化したラット肝臓ペルオキシソームに取り込ませる系(試験管内インポート系)を確立し、AOXのカルボキシル末端3残基Ser-Lys-Leu-COOH(SKL配列)、ウリカーゼのカルボキシル末端3残基Ser-Arg-Leu-COOH(SRL配列)がペルオキシソーム局在化シグナルの最少単位であることを証明し、さらに両者は同経路でペルオキシソームへ移行することを証明してきた。
本年度はこれら蛋白質のペルオキシソームへの移行に際しエネルギー源としてATPが利用されていることを明らかにすると共に、ウサギ網状赤血球溶血液中にペルオキシソーム移行を促進する蛋白性の因子が存在することを明らかにした。このことはラット肝細胞中のサイトソ-ルにも同因子が存在することを非常に強く示唆するものであるが、現在のところット肝細胞中のサイトソ-ルにはペルオキシソームへの移行を促進する活性は未だ検出できていない。
一方、SKL配列のレセプターがペルオキシソームの膜上にあると仮定し、純化したペルオキシソームを可溶化後、SKL配列を含む合成ペプチドをリガンドにしたアフィニティークロマトグラフィーにより検索を試みた結果、分子量28Kの蛋白質が同定できた。しかしながらこの蛋白質は詳細な解析の結果ウリカーゼであることが判明し、現在検索の対象をペルオキシソームとラット肝サイトソ-ルに絞って解析中である。
また上記蛋白質とは異なるペルオキシソーム局在化シグナルを持つ3-ketoacy-CoA thiolaseについても試験管内インポート系の確立に成功した(J.Biochem.115,1064-1068)。今後これらシグナルの異なる蛋白質が全く異なった経路または、ある程度共通の経路でペルオキシソームへ移行するのかを明らかにする準備が出来たものと評価される。
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