メダカ生殖腺分化形成に於ける遺伝子発現解析

Research Project

Project/Area Number	06270222
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Okazaki National Research Institutes
Principal Investigator	田中実岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 助手 (80202175)
Project Period (FY)	1994
Project Status	Completed (Fiscal Year 1994)
Budget Amount *help	¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000) Fiscal Year 1994: ¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Keywords	芳香化酵素 / 性決定 / SOX遺伝子 / メダカ / 生殖腺 / 性分化 / エストロゲン
Research Abstract	哺乳類では最初期の性決定の過程でY染色体上のSryが発現する事により生殖原器が精巣へと分化する。メダカでもこの時期にSry様遺伝子が働いているかを調べる事はメダカで生殖腺分化形成過程を調べる上で重要である。一方、メダカは性決定後の生殖腺形成中にステロイドホルモンを投与する事で性転換を引き起こさせる事が可能である。そこで、雌性ホルモンを産生させる酵素の遺伝子 P450arom とSry様遺伝子に着目し、その単離、発現解析を行い、以下の結果を得た。 1) メダカゲノムから単離していたSry様配列を用いてゲノミックサザンを行い、雌雄両ゲノムに複数Sry様配列がある事が明らかとなった。またノーザンブロット解析により胚発生中に2種類の転写物を見出したため、cDNAを単離し、whole mount in situ hybridization により発現様式を明らかにした。その結果、生殖細胞に発現が見られ、受精後も、胞胚までは胚中に均一に発現が認められた。その後発現は、恐らく神経になりうる細胞系譜に限定される事が示された。 2) whole mount in situ hybridization により P450arom の発現様式が初期卵濾胞と成熟期近くの卵濾胞とで異なる事を明らかにした。一方、P450arom は転写レベルで制御されている事が示唆されていたため、遺伝子を単離し、転写開始点を決定、しかも初期、後期双方の濾胞で同じプロモーターが使われている事が 5'RACE により示唆された。