蛋白質複合体構造解析のためのNMR手法の開発

• Project/Area Number: 06276204
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 永山 国昭 東京大学, 教養学部, 教授 (70011731)
• Project Period (FY): 1994
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1994)
• Budget Amount: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000); Fiscal Year 1994: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
• Keywords: NMR / 蛋白質 / 構造解析 / 蛋白質複合体

Research Abstract

大腸菌由来のリボヌクレアーゼHIを用いて遺伝融合2量体を作成した。構成単量体が順方向にN末C末でポリペプチド鎖(リンカー)を介してつながっている。長さと組成の異なるリンカーを2種類くみこみ、2種類の人工的リボヌクレアーゼ2量体を作った。この内8残基のペプチドをリンカーとした2量体についてその構造をNMRの種々の手法(T_1,T_2,NEO,緩和剤の影響等)を駆使して単量体と比較しながら調べた。T_1,T_2の単量体の差、2量体でNOEが新しく出現すること、緩和剤が2量体接合部に入らない事などからこの2量体はコンパクトな会合体を作り、その接触部位はリンカーの結合部位(N末とC末)の近傍にあることが分かった。