| Project/Area Number |
06276217
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Tokyo University of Science |
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Principal Investigator |
吉田 充輝 東京理科大学, 基礎工学部, 教授 (20005648)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白川 仁 東京理科大学, 基礎工学部, 助手 (40206280)
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| Project Period (FY) |
1994
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1994)
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| Budget Amount *help |
¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Fiscal Year 1994: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
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| Keywords | HMG1タンパク質 / HMG2タンパク質 / DNA結合性タンパク質 / HMG box / 転写調節因子 / クロマチン |
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| Research Abstract |
〔1〕HMG1およびHMG2単独DNA結合領域の構造解析:HMG1,HMG2のcDNAのうち、それぞれのドメインAおよびドメインBをコードする領域を発現ベクター(pGEM-EX)のT7プロモーターの下流に挿入し、大腸菌BL21株で高発現させ、均一になるまで精製することに成功した。さらに、一次構造とDNA結合能を有することを確認した。現在、高次構造の解析を大阪大学蛋白質研究所の協力のもとにNMRにより、また奈良技術大学院大学の協力のもとにX線解析により進めている。
〔2〕DNA結合領域、ドメインA+Bの構造解析:HMG1,HMG2のcDNAより、ドメインA+Bをコードする領域を同様に発現ベクターに挿入し、大腸菌で高発現させ、均一になるまで精製することに成功した。さらに、一次構造とDNA結合能を有することを確認した。今後、上記の解析結果を参考にしながら、高次構造の解析を大阪大学蛋白質研究所の協力のもとにNMRにより、また奈良技術大学院大学の協力のもとにX線解析により進める予定である。
〔3〕表面プラズモン共鳴技術(BIAcore System)を用いたDNA結合領域とDNAとの相互作用の解析:上記のDNA結合領域A,B,A+Bに加えてそれらを結ぶリンカー(l)をもつAl,Bl,AlBlを同様に調製した。これらとDNAとの相互作用をBIAcore Systemを用いて検索した。その結果、リンカー領域がHMG1,HMG2の立体構造保持と結合強化に重要であり、また結合が多段階反応であることが明らかとなった。
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