腎臓KチャンネルcDNAのクローニング

• Project/Area Number: 06454354
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Kidney internal medicine
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 鈴木 誠 自治医科大学, 医学部, 助教授 (10196868)
• Project Period (FY): 1994
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1994)
• Budget Amount: ¥7,600,000 (Direct Cost: ¥7,600,000); Fiscal Year 1994: ¥7,600,000 (Direct Cost: ¥7,600,000)
• Keywords: ホモロジー / アイソフォーム / ファミリー

Research Abstract

腎集合管より単離された、pH感受性のK channel(RACTK1)を用いホモロジークローニングを試みた。40種類のPCR増幅産物よりホモロジーの高い物から、低い物10種類についてラット腎cDNAライブラリーをスクリーニングし、3つのcDNAが単離された。しかし、1つはchannelとは無関係でtransposonの1つであった。1つは、Shaker K channelの一部にホモロジーを有する678塩基95アミノ酸をコードする2回膜貫通構造を有する蛋白であるが、K channel特有のアミノ酸配列は有していない。現在この蛋白について、発現などを検討中である。今1つのcDNAはRACTK1と90%以上のホモロジーを有し、exonskippingを有した940塩基であった。サザンブロットの結果は、RACTK1と同一のRFLPでisoformと考える。ゲノム上でのsplicingを検討するためにPCRを行ったが、exon内のskippingの可能性もあり、またtissue specificなisoformの可能性もあり、この点を明らかにするために現在ゲノムのクローニングと発現を進めている。また同じisoformは人よりも得られている。さらに新しいファミリーの検索としてPCR増幅の位置を膜貫通部位に変更し検討しているが、この場合は増幅産物の期待値が大きくmismatchの増幅産物になる可能性がある。腎外臓器についても検討し、免疫染色ではRACTK1が存在しない臓器からもホモロジーの高いプローベが得られた。結論;3つのcDNAが単離された。Alternative splicing typeのRACTK1が得られた。さらに腎外臓器では、期待できるプローベが得られcDNAを単離中である。ホモロジーの低い産物についても検討できた。