蚊の卵形成機構の分子生物学的研究ビテロジェニン遺伝子のクローニングと構造解析

• Project/Area Number: 06670268
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 寄生虫学(含医用動物学)
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 福永 昭廣 大阪市立大学, 医学部, 講師 (90167619)
• Project Period (FY): 1994
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1994)
• Budget Amount: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 1994: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
• Keywords: 蚊 / 卵形成 / ビテロジェニン / クローニング

Research Abstract

トウゴウヤブカの卵形成機構を遺伝子レベルで解明するため、卵黄タンパク質の前駆体であるビテロジェニンの遺伝子発現機構の解析を行っている。トウゴウヤブカの卵黄タンパク質は分子量の違いからp200、p67、p63(分子量200kDa、67kDa、63kDa)の3種に分けることができるが、既に、p200のビテロジェニンcDNAクローンの単離に成功し、p200に対するmRNAはすくなくとも2種あることを示唆する結果を得ている。本研究の目的は、まだ単離していないp67とp63のビテロジェニンcDNAクローンの単離を行い、トウゴウヤブカの3種のビテロジェニンmRNAの構造を明らかすることである。
トウゴウヤブカ雌成虫のmRNAを鋳型に、オリゴ(dT)をプライマーにして合成したcDNAを、形質発現ベクターであるλZAPIIに組み込みcDNAライブラリーを作成した。このcDNAライブラリーをイムノスクリーニングしたところ、p200に対するウサギ抗血清では1×10^4プラークから25個の陽性クローンを得ることができた。一方、p67、p63に対するウサギ抗血清では32×10^4プラークをスクリーニングしたにもかかわらず陽性プラークを全く得ることができなかった。この結果は、トウゴウヤブカの3種のビテロジェニンのmRNAは一本のビテロジェニンmRNA上にあり、3′-poly(A)側にp200のビテロジェニン領域、その5′側にp67とp63のビテロジェニン領域があることを示唆していると考えられるため、現在、p200のcDNAの5′末端領域のアンチセンスプライマーやランダムヘキサマーをプライマーとした複数のcDNAライブラリーを作成し、ビテロジェニンmDNAの5′端側のcDNAクローンおよびp67、p63のcDNAクローンの単離を進めているところである。