コレラ菌の産生する新しい下痢原因毒素,ZOT,の精製と解析
| Project/Area Number |
06670290
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Bacteriology (including Mycology)
|
|---|
| Research Institution | Kyoto University |
|---|
Principal Investigator |
倉園 久生 京都大学, 医学部, 助手 (90186487)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹田 美文 国際医療センター研究所, 所長 (30029772)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1994 – 1996
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1994)
|
| Budget Amount *help |
¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 1994: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
|
|---|
| Keywords | Vibrio cholerae / 下痢 / ZOT / 蛋白毒素 / 精製 |
|---|
| Research Abstract |
ZOTをcodeするDNA断片をpUCベクターにクローニングし、大腸菌で発現させたところ、菌の増殖が全く見られなかった。ZOTの塩基配列のうち疎水性部分は膜貫通部位と考えられるため(Koonin EV,FEBS Lett,312:3-6,1992)、大腸菌におけるZOTの強度の発現は大腸菌に対して致死的に働いたと考えられる。このため、全塩基配列のうち膜貫通部位と考えられるC末部分を削除し、N末部分のみをGlutathione S-transferase(GST)とのフュージョン蛋白として大腸菌で発現させた。このフュージョン蛋白より精製したZOTのN末部分でウサギを免疫し、ZOTのN末部分に対する特異抗体を作成した。この抗体を用いてZOTに対するビーズELISAを構築したところ、抗GST抗体をかなり含んでいることがわかった。このため、このconjugateをGSTで吸収しZOTに対する特異性を高めた。現在、この検出方法を用いて野生株からのZOTの精製を試みている。
|
Report
(1 results)
Research Products
(1 results)
